Orexin medierar initiering av sexuellt beteende hos sexuellt naiva manrotter, men är inte kritisk för sexuell prestation (2011)

Horm Behav. Författarens manuskript; tillgänglig i PMC 2011 Aug 1.

Publicerad i slutredigerad form som:

PMCID: PMC2917508

Förlagets slutredigerade version av denna artikel finns tillgänglig på Horm Behav

Se andra artiklar i PMC som citerar den publicerade artikeln.

Gå till:

Abstrakt

Den hypotalamiska neuropeptiden orexin medierar upphetsning, sömn och naturligt givande beteende, inklusive matintag. Manligt sexuellt beteende förändras av orexinreceptor-1-agonister eller antagonister, vilket föreslår en roll för orexin-A i detta naturligt givande beteende. Den specifika rollen som endogen orexin-A eller B i olika delar av manlig sexuellt beteende är dock för närvarande oklart. Därför använder de aktuella studierna markörer för neuralt aktivering och orexin-cellspecifika lesioner för att testa hypotesen att orexin är kritisk för sexuell motivation och prestanda hos hanrotter. För det första visades cFos-uttryck i orexin-neuroner efter presentation av en mottaglig eller icke-mottaglig kvinna utan ytterligare aktivering av olika delar av parning. Därefter testades den funktionella rollen av orexin med användning av orexin-B-konjugerad saporin, vilket resulterade i orexincellskroppsskador i hypotalamusen. Lesioner utfördes hos sexuellt naiva män och efterföljande sexuellt beteende registrerades under fyra parningsprover. Lesionsmans män visade förkortade latenser för montering och intromit under de första, men inte efterföljande parningsproverna, vilket tyder på att lesioner underlättade initiering av sexuellt beteende hos sexuellt naiva men inte erfarna män. På samma sätt påverkar lesioner inte sexuell motivation hos erfarna män, bestämda av banaförsök. Slutligen visade förhöjda plus labyrint tester minskad ångestliknande beteende hos lesionerade män, som stödde en roll för orexin i ångest i samband med initial exponering för honan hos naiva djur. Sammantaget visar dessa resultat att orexin inte är kritisk för manlig sexuell prestation eller motivation, men kan spela en roll i upphetsning och ångest i samband med sexuellt beteende hos naiva djur.

Nyckelord: orexin, hypokretin, sexuellt beteende, kopiering, neuralt aktivering, motivation, hypotalamus, nyhet, upphetsning, ångest

Beskrivning

Orexin, även känt som hypokretin, är en hypotalamisk neuropeptid som är kritisk för utfodringsbeteende, (de Lecea et al., 1998; Sakurai et al; 1998, Sakurai, 2006; Benoit et al., 2008) upphetsning och sömn (Chemelli et al., 1999; Lin et al., 1999, Sakurai, 2007; Furlong och Carrive, 2007; Furlong et al., 2009; Carter et al., 2009). Orexin-neuroner är lokaliserade till det laterala hypotalamiska området (LHA) och periferisk dorsomedialhypotalamus (PFA-DMH) och producerar två neuropeptider, orexin-A och B (de Lecea et al., 1998; Sakurai et al., 1998). Orexinneuroner har visat sig vara projektiva för hjärnstrukturer som är involverade i förmedling av upphetsning inklusive locus coeruleus, tuberomammillärkärnan och pedukulopontin tegmental-kärnan (Peyron et al., 1998; Hagan et al., 1999; Horvath et al., 1999; Baldo et al., 2003). Orexin har också blivit involverad i belöning och motivation, särskilt relaterad till mat och droger av missbruk (Aston-Jones et al., 2009a; Aston-Jones et al., 2009b) och orexinneuroner har visat sig vara projektiva för att belöna relaterade hjärnstrukturer i mesolimbic systemet inklusive ventral tegmental area (VTA) och nucleus accumbens (NAc) (Peyron et al., 1998; Fadel och Deutch, 2002; Martin et al., 2002; Baldo et al., 2003). Orexin-neuroner aktiveras av konditionerade kontextuella signaler i samband med kost och läkemedelsbelöning (Harris et al., 2005; de Lecea et al., 2006; Choi et al., 2010) och har visat sig spela en roll i belöningsbaserat utfodringsbeteende (Choi et al., 2010). Dessutom resulterar intracerebroventrikulär (ICV) eller intraperitoneal administrering av en orexinreceptor 1 (ORX1) antagonist i minskad motivation för smaklig mat (Thorpe et al., 2005; Nair et al., 2008), medan ICV-orexin-A-administrationen kan återinföra denna motivation (Boutrel et al., 2005).

Orexins roll i andra givande beteenden är för närvarande oklart, även om flera studier har inneburit en roll för orexin för kontroll av sexuellt beteende hos hanrotter. Det har tidigare visat sig att orexin-neuroner aktiveras genom samling i hanrotter (Muschamp et al., 2007). Dessutom resulterade administrering av orexin-A i det mediala preoptiska området (mPOA) i förbättrad sexuell prestation visad av reducerade latenser för montering och intromit samt ökade frekvenser av fästen och intromission (Gulia et al., 2003). I motsats dämpade ICV-administreringen av orexin-A sexuell motivation genom att minska kvinnors preferens, även om det endast var av högt sexuellt motiverade män (Bai et al., 2009). Studier som använde ORX1-antagonister har också visat motsägelsefulla data, eftersom systemisk administrering av ORX1-antagonisten svagt försämrad sexuell prestanda genom att öka latensen till intromit utan att påverka andra parametrar för sexuellt beteende (Muschamp et al., 2007), medan ICV-administrering av ORX1-antagonisten inte hade någon effekt på sexuell motivation (Bai et al., 2009). Tillsammans tyder dessa studier på att administrering av exogent orexin-A påverkar sexuell prestanda och motivation; Ändå kan endogen orexin inte spela en viktig roll för att förmedla sexuellt beteende (Bai et al., 2009). Därför var målet med den nuvarande studien att avgöra om endogen orexin är väsentlig för sexuell motivation och prestanda hos manråttor.

Först bestämdes det när orexin-neuroner aktiveras under sexuellt beteende, och testar hypotesen att orexin-neuroner aktiveras vid introduktion av den givande stimulansen. Dessutom har det visat sig att sexuell erfarenhet påverkar sexuell prestation (Dewsbury, 1969) och de givande egenskaperna hos sexuellt beteende (Tenk et al., 2009), bestämdes huruvida sexuell erfarenhet påverkar orexin-neuronaktivering under parning. Slutligen testades huruvida orexin spelar en kritisk roll i sexuell motivation och prestanda med hjälp av cellkroppsspecifika lesioner av orexinneuroner.

Material och metoder

Vuxna manliga Sprague Dawley-råttor (200-250g) erhölls från Harlan (Indianapolis, IN) eller Charles River Laboratories (Sherbrooke, Quebec, Kanada) och inrymdes individuellt eller parvis beroende på det individuella experimentet (se nedan) i plexiglasburar. Koloninrummet behölls på en 12 / 12-omvänd ljusmonk cykel (lyser av vid 10 am) och mat och vatten var tillgängliga AD libitum utom vid beteendestestning. Kvinnliga Sprague-Dawley-råttor erhölls från Harlan (Indianapolis, IN) eller Charles River Laboratories (Sherbrooke, Quebec, Kanada) ovariektomiserades bilateralt och implanterades subkutant med 5% 17-P-östradiolbensoat-silastiska kapslar. Sexuell mottaglighet inducerades genom subkutana injektioner av progesteron (500 μg i 0.1ml sesamolja) ungefär 4 h före parningstider. Alla förfaranden godkändes av djurvårdskommittéerna vid University of Cincinnati och University of Western Ontario och överensstämmer med riktlinjerna som utarbetats av National Institute of Health och Canadian Council on Animal Care. All beteendestestning utfördes under den första halvan av den mörka fasen under dim röd belysning, förutom om det noteras annat.

Experimentell design

cFos-expressionsstudier

Manliga råttor (n = 48) hölls individuellt och hälften av djuren fick sexuell erfarenhet i hemburet under 5 två gånger i veckan parning sessioner. Parningstester utfördes i hemmaburen för att eliminera upphetsning och cFos-uttryck inducerat genom exponering för en annan parningsarena och exponering för konditionerade indikatorer som hör samman med tidigare parning (Balfour et al., 2004). En mottaglig kvinna introducerades i hemburet, och manar fick få hjälp till en utlösning eller för 60-minuter. Under varje test observerades sexuellt beteende. Det totala antalet monteringar och intromissioner samt latenser till första montering och intromission (tiden från presentationen av den mottagliga kvinnan till den första monteringen eller intromissionen) och ejakulationen (tiden från den första intromissionen till utlösningen) registrerades (Agmo, 1997). Den återstående halvan av djuren förblev sexuellt naiv. Dessa djur hölls i samma rum som de sexuellt erfarna männen, hanterades och utsattes för lukt och ljud som hörde ihop med parning, men mötte inte. Naiva och erfarna djur delades vidare in i 6 experimentella grupper (n = 4 per grupp). De 6 naiva och erfarna grupperna inkluderade: Kontroll män utan exponering för sexuellt beteende (Home Cage); män utsatt för en icke-mottaglig kvinna i hemburet för 15 minuter (Anestrous Female). Manspersoner kunde undersöka och interagera, men mötte inte på grund av brist på kvinnlig mottaglighet. män utsatt för lukt av en mottaglig kvinna placerad i en trådnätlåda ovanpå hemburet för 15 minuter (Estrous Female); män som visade fästen, men inte intromissioner eller ejakulation med vaginalt maskerade honor (Mount); män som endast visade monteringar och intromisser (Intromission); och män som parades till en utlösning (ejaculation). En timme efter provets slut offrades manliga för att analysera cFos-uttryck. Sexuellt erfarna grupper matchades med parametrar av sexuellt beteende och det fanns inga signifikanta skillnader mellan grupper före det slutliga testet. Vidare fanns inga signifikanta skillnader mellan naiva och erfarna grupper i antal fästen plus intromissioner under det slutliga provet.

Perfusioner: cFos-uttryck

Alla män blev djupbedövade med natriumpentobarbitol (270 mg / ml) och transkartiellt perfusionerades med 4% paraformaldehyd (500 mL; PFA). Efter perfusion avlägsnades hjärnorna omedelbart och efter fixering i en timme i samma fixativ överfördes sedan till 20% sackaroslösning för kryoprotektion. Hjärnor delades upp på en frysande mikrotom (Microm, Walldorf, Tyskland) i koronala sektioner av 35 μm och samlades i 4 parallella sektioner i kryoskyddande lösning (30% sackaros i 0.1 M PB innehållande 30% etylenglykol och 0.01% natriumazid) och lagrade vid -20 ° C tills vidare bearbetning.

immunohistokemi

Alla inkubationer utfördes vid rumstemperatur med försiktig omröring. Fria flytande sektioner tvättades omfattande med 0.1M-saltlösningbuffrad natriumfosfat (PBS). Sektioner blockerades med 1% H2O2 (30% stocklösning) i PBS under 10-minuter, sköljdes sedan i stor utsträckning igen med PBS. Sektioner inkuberades med en inkubationslösning (PBS innehållande 0.1% bovint serumalbumin och 0.4% Triton X-100) under 1-timme. Primär antikroppsinkubationer utfördes i inkubationslösningen över natt vid rumstemperatur. Efterföljande färgningssektioner sköljdes i PBS, monterade på pläterade glasskivor och täckt med dibutylftalatxylen (DPX).

cFos / orexin

En serie av sektioner immunbehandlades för cFos och orexin. Sektioner inkuberades över natten med en kaninhöjd antikropp som igenkänner cFos (kanin-anti-cFos, sc-52; 1: 10 000, Santa Cruz-bioteknik, Santa Cruz, CA) följt av 1-timmars inkubationer med biotinylerad get anti-kanin (1: 500 , Vektorlaboratorier, Burlingame, CA) och ett avidin pepparrotsperoxidaskomplex (1: 1000, ABC-kit, Vector Laboratories, Burlingame, CA). Sektioner inkuberades under 10 minuter i 0.02% diaminobensidin (DAB) (Sigma, St. Louis, MO) i 0.1M fosfatbuffert (PB) innehållande 0.012% väteperoxid och 0.08% nickelsulfat, vilket resulterade i en blåsvart reaktionsprodukt. Sektioner inkuberades därefter över natten med en kaninhöjd antikropp som igenkänner orexin-A (kanin-anti-orexin-A, H-003-30; 1: 20 000, Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA) följt av en inkubation med 1-timmen med biotinylerad get anti -rabbit och ABC, såsom beskrivits ovan. Slutligen inkuberades sektionerna i 10 minuter med 0.02% DAB i 0.1M PB innehållande 0.012% väteperoxid, vilket resulterade i en rödbrun reaktionsprodukt.

Alla antikroppar har tidigare karakteriserats (Chen et al., 1999; Satoh et al., 2004; Solomon et al., 2007). Immunohistokemiska kontroller innehöll utelämnande av primära antikroppar, western blot-analys som demonstrerade enskilda band vid lämplig vikt (cFos) och förlust av immunohistokemisk orexinsignal med orexin B-saporin-lesioner (orexin).

Dataanalys

cFos / orexin

Neuroner märkta för orexin eller orexin och cFos räknades bilateralt i tre representativa sektioner per djur som är kända för att innehålla maximala antal av den orexin-neuronala populationen (Sakurai et al., 1998) som spänner över -2.3 mm till -3.6 mm från bregma (Paxinos och Watson, 1998) (Figur 1), med hjälp av ett ritningsrör fäst vid ett Leica-mikroskop (Leica Microsystems, Wetzlar Germany), av en observerad blindad till experimentella grupper. PFA-DMH och LHA definierades baserat på placeringen av fornixen (Figur 1a). Procentandelar av orexin-neuroner som uttrycker cFos beräknades och medelvärdes per halvklot för varje djur och gruppmedel beräknades. Statistisk signifikans mellan grupper bestämdes med användning av en tvåvägs ANOVA med sexuell upplevelse och sexuellt beteende under slutprovet som faktorer följt av Fishers LSD-test med en konfidensnivå av 95%.

Figur 1 

Placering av orexinneuroner i hypotalamusen. (A) Anatomisk lokalisering av orexinneuroner i hypotalamusen. (Paxinos och Watson, 1998), Skalafält: 200 μm. (B) Singelmärkta orexin-neuroner i PFA-DMH i ett omoderat kontrolldjur. (C) Orexin .

Orexin Lesion Studies

Kirurgi

Mansor hölls individuellt och gavs en pre-test parning session med en mottaglig kvinna före läsning och skakoperation. Sexuellt beteende registrerades som beskrivet ovan och grupper matchades baserat på parametrar för parningsbeteende. Manliga råttor bedövades med isofluran (Abbot Laboratories, St. Laurent, Quebec, Kanada) med användning av en Surgivet Isotec4-gasapparat (Smiths Medical Vet Division, Markham, Ontario, Kanada) och placerades i en stereotaxisk apparat (Kopf Instruments, Tujunga, CA) med en gasmask som täcker näsan och munen för att upprätthålla anestesi. Ett snitt gjordes för att avslöja skallen och lambda och bregma hittades och bestämdes att vara nivå. Ett hål borrats i skallen med en dremelborr (Dremel, Racine, WI) och glasmikropipetter (40μm-diameter, World Precision Instruments Inc, Sarasota, FL) fylld med ett målat toxin orexin-B saporin (IT-20, Advanced Targeting Systems, San Diego, CA; 200ng / μl i PBS); eller icke-konjugerat toxin BLANK-saporin (IT-21, avancerade riktade system, San Diego, CA; 200ng / μL i PBS; sham kontroller) sänktes i hypotalamus. Detta riktade toxin har visats binda med hög affinitet till celler som uttrycker orexinreceptor 2 (ORX2) och med signifikant lägre affinitet för celler som uttrycker ORX1 (Gerashchenko et al., 2001) och har visats att specifikt ablera orexinneuroner i hypotalamusen (Frederick-Duus et al., 2007). Bilaterala infusioner av 1 μL (2 per halvklot) injicerades vid följande koordinater: AP = -2.8 och -3.2; ML = 0.7 och 0.8; DV = -9.0 (Paxinos och Watson, 1998). Efter varje infusion lämnades nålen på plats för 3-minuter för att tillåta diffusion. Nålarna togs långsamt bort och såren stängdes med sårklämmor. Två veckor efter lesionoperation testades alla män för sexuell erfarenhet under fyra parningsprover och utsattes sedan för landningsbanan och / eller förhöjd plus labyrintest (se nedan). Surgerier utfördes i tre olika kohorter, separerade av flera veckor, för att nå tillräckligt många djur per grupp.

Sexuellt beteende

Alla män testades för sexuellt beteende under 4 parning sessioner som utförs varannan dag i hemburet. Under varje session parades män med en mottaglig kvinna till en utlösning eller för 60 minuter, beroende på vilken som kom först. Parningsbeteende registrerades som beskrivet ovan och beräkningseffektiviteten beräknades också [antal intromissioner / (antal mounts + antal intromisser)]. Statistiska skillnader i parametrar för sexuell prestanda jämfördes mellan lesions- och skamgrupper för varje försök med användning av en enda ANOVA med læsionskirurgi som en faktor och Fisher's LSD-test med en konfidensnivå av 95%, eller vid behov kördes icke parametriska test med användning av en Kruskal-Wallis envägs ANOVA med lesionkirurgi som en faktor och Dunns test med en 95% konfidensnivå. Dessutom jämfördes data för varje grupp med pre-kirurgiska data med användning av parade t-test.

Sexuell motivation: Runway Test

Efter undersökning av sexuellt beteende testades en undergrupp av de nu sexuellt erfarna männen för sexuell motivation med en rak banaapparat (MED Associates Inc., St Albans, VT) (120 cm lång; Lopez et al., 1999). Män som habituerade till bananordningen över två efterföljande 10-minuters försök som genomfördes samma dag. Därefter genomfördes två försöksförsök. Under första försöket placerades ett stimulusdjur (östrokvinna, anestrous kvinna eller man) i en mållåda med perforerade delare vid banans slut. En fläkt användes för att blåsa doften av stimulansdjuren mot hanen. Experimentella män placerades i startlådan, dörren öppnades för att tillåta tillträde till landningsbanan, och tiden för att nå mållådan registrerades. När man hade nått mållådan fick manar 30 sekunder för att interagera med stimulansdjuret bakom skärmen. En identisk andra försök följde 1 timme senare. Statistisk signifikans mellan tider för att nå målrutan mellan försök 1 och försök 2 analyserades med parningstest med en konfidensnivå på 95%. Statistisk signifikans mellan grupper bestämdes med användning av en envägs ANOVA med lesionoperation som en faktor följt av Fishers LSD-test med en konfidensnivå av 95%.

Ångestliknande beteende: Förhöjd Plus Maze

En undergrupp av de nu sexuellt erfarna männen testades för ångestliknande beteenden för att avgöra om effekter av orexin-lesioner på sexuell prestation eller motivation berodde på förändringar i ångest eller upphetsning. Manspersoner exponerades för den förhöjda plus labyrintapparaten (EPM, MED Associates Inc., St. Albans, VT) i ett ljus upplyst rum under slutet av ljusfasen. EPM bestod av 4-armar varje 50 cm i längd som sträckte sig från en central korsning och var upphöjd 75 cm. Djurens två armar var öppna för yttre miljö och de andra två var inneslutna med mörk siding 40 cm hög. Djur placerades på EPM och övervakades i fem minuter. Tid spenderad i öppna och stängda armar och totalt antal inmatningar i varje arm registrerades med hjälp av fotobildsarrayer. Statistisk signifikans mellan grupper bestämdes med användning av en envägs ANOVA med lesion som en faktor följt av Fishers LSD-test med en konfidensnivå av 95%.

Perfusioner och parning-inducerad cFos

Efter alla beteendeprövningar perfekterades alla män djupt med natriumpentobarbitol (270mg / ml) och transkartiellt perfusionerades med 500 ml 4% PFA för lesionsverifiering som beskrivits tidigare. Dessutom, för att testa effekterna av orexin-lesioner på parning-inducerad cFos-expression, sammankopplade grupper av sham och lesion-män till en utlösning. En timme efter utlösning perfekterades män transcardiellt med 4% PFA såsom beskrivits ovan. Hälften av männen i denna grupp introducerades inte för en kvinna och perfuserades från hemburet för att fungera som obemannade kontroller.

immunohistokemi

Hjärnor delades med hjälp av en frysande mikrotom i 4 parallella serier av 35 μm koronala sektioner och lagrades som beskrivet ovan. För lesionsverifiering var en serie av sektioner innehållande hypotalamus från alla lesionsexperiment ensammärkta för orexin med användning av samma kanin-anti-orexin-A- och DAB-protokoll som beskrivits ovan. En serie av sektioner från de djur som parades var färgad för cFos och orexin som beskrivits ovan.

Lesion Verification

I varje djur räknades antal orexin-neuroner immunreaktiva för orexin bilateralt i PFA-DMH och LHA i 3-sektioner som uttryckte maximalt antal orexinceller i icke-kirurgiska kontroller, -2.3 mm till -3.6 mm från bregma som beskrivits ovan. Celler per halvklot var medelvärde för varje djur och gruppmedel beräknades. Icke-kirurgiska kontrolldjur (från cFos-experiment) användes för bestämning av intakta / baslinjeantal av orexin-neuroner och data uttrycktes som procentandelar jämfört med de icke-kirurgiska kontrollmanarna (Figur 2). Män som hade färre än 20% orexinceller jämfört med icke-kirurgiska kontrolldjur inkluderades i lesionsgruppen. Djur med större än 20%, men färre än 80% inkluderades i en partiell lesionsgrupp. Sham kontroller hade inte signifikanta förändringar i antalet orexin celler. Statistisk signifikans mellan skam, partiella och kompletta lesionsdjur beräknades med användning av ett envägs ANOVA och Fishers LSD-test med en konfidensnivå av 95%.

Figur 2 

Lesion verifiering. Representativa bilder som visar orexin (A) och MCH (B) -celler i ett skam-lesionsdjur injicerat med BLANK-saporin. Representativa bilder som visar förlust av orexinceller (C), men intakta MCH-celler (D) i ett lesionsdjur injicerat med orexin .

Lesionsspecificitet

För att verifiera att lesioner var begränsade till orexin-neuroner, var en serie av sektioner innehållande hypotalamus från en delmängd av skam och lesionsdjur (n = 20) immunprocesserad för melanocytkoncentrerande hormon (MCH), en hypotalamisk peptid som har överlappande plats (men nej kolokalisering) med orexin-neuroner (Broberger et al., 1998) med användning av en kaninhöjd antikroppsigenkännande MCH (kanin-anti-MCH, H-070-47; 1: 150 000, Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA) och DAB såsom beskrivits tidigare. MCH neuroner uttrycker ORX1 (Bäckberg et al., 2002) men inte ORX2 (Volgin et al., 2004) och minskas inte signifikant efter orexin B-saporinbehandling (Frederick-Duus et al., 2007). MCH-immunoreaktiva celler räknades bilateralt i två sektioner per djur (sham: n = 7; lesion n = 5) med användning av alternativa sektioner till de som analyserades för orexin-neuroner. Lesioner reducerade inte signifikant antalet MCH neuroner i antingen PFA-DMH eller LHA (Tabell 1; Figur 2b, d; PFA-DMH: p = 0.47; LHA: p = 0.33). Vidare räknades parning inducerad cFos-expression bilateralt i en representativ sektion per djur (sham: n = 4; lesion n = 3) med användning av alternativa sektioner till de som analyserades för orexin-neuroner. Lesioner påverkar inte parning-inducerad cFos-expression i PFA-DMH eller LHA (Tabell 1; PFA-DMH: p = 0.53; LHA: p = 0.82). Slutligen var representativa sektioner som användes för orexincelltal (djur: sham: n = 6; lesion: n = 6) Nissl motsträngad med användning av cresylviolett (5 g-cresylviolettacetat (C-5042, Sigma, St. Louis, MO), 0.5 g natriumacetat-trihydrat (S209, Thermo Fisher Scientific, Ottawa, Ontario, Kanada), 1L dubbeldestillerat vatten med isättika (AX0073-6, EMD Chemicals, Mississauga, Ontario, Kanada) vid pH: 3.14). Antalet Nissl-färgade neuroner utfördes i standardområdena för analys (250 μm × 200 μm) i den allmänna lokaliseringen av orexin-neuroner. Antalet Nissl-färgade neuroner skilde sig inte mellan skam och lesionsgrupper (Tabell 1; PFA-DMH: p = 0.23; LHA: p = 0.33).

Tabell 1 

Verifiering av lesionsspecificitet: Analys av antalet neuroner färgade för Nissl, MCH eller parning inducerad cFos visade att det inte fanns någon signifikant förlust av neuroner i allmänhet, MCH-celler eller parning inducerad neural aktivering i PFA-DMH eller .

Eftersom en brist i orexin har visats bidra till narkolepsi hos möss (Chemelli et al., 1999), hundar (Lin et al., 1999) och människor (Siegel, 1999; Nishino et al., 2000; Peyron et al., 2000; Thannickal et al., 2000) djur observerades för att säkerställa frånvaron av en narkoleptisk fenotyp. Djur observerades under hela samtliga beteendestest som rapporterades i denna studie och uppvisade inga egenskaper hos narkolepsi.

Parning-inducerad cFos-expression i lesionsdjur

Antal cFos-immunoreaktiva celler räknades bilateralt i 3-sektioner per djur i standardområden för analys i ventral tegmentalområdet (VTA; 900 × 900 μm), mPOA (400 × 600 μm); kärnan accumbens (NAc) kärna och skal (400 × 600 μm) och de prelimbiska, infralimbiska och främre cingulära delregionerna av medial prefrontal cortex (mPFC) (600 × 800 μm per subregion) av en observerad blindad till experimentella grupper . Antalet medelvärden var genomsnittliga för varje djur och gruppmedlemmar beräknades. Statistisk signifikans beräknades med hjälp av en tvåvägs ANOVA med sexuell erfarenhet och skada som faktorer följt av Fishers LSD-test med en konfidensnivå på 95%.

Resultat

Orexin-neuronaktivering under sexuellt beteende

En signifikant ökning av cFos-uttryck i orexin-neuroner observerades efter sexuellt beteende i både PFA-DMH (F(5,31) 63.4; p <0.001; Figur 3a) och LHA (F(5,31) 10.4; p <0.001; Figur 3b), utan effekt av sexuell erfarenhet. Speciellt i alla sexuella naiva och erfarna djur uppvisade alla experimentella grupper av män som uppvisade olika parametrar av sexuellt beteende (undersökning av anestrogen kvinnan, exponering för östliga kvinnliga luktar, visning av montering, intromissioner eller ejakulation) lika induktion av cFos jämfört med hem burkontroller med en högre andel orexinceller aktiverade i PFA-DMH (60-80%) jämfört med LHA (14-33%) utan skillnader mellan försöksgrupperna. Dessa resultat tyder på att orexin-neuroner aktiveras efter exponering för stimuluskvinnan utan ytterligare aktivering under sexuell prestation. Vidare är aktiveringen inte beroende av stimulanshöjden hos kvinnostimulans eftersom både icke-mottagliga och receptiva kvinnor inducerad aktivering hos sexuellt erfarna män.

Figur 3 

Orexin-neuroner i PFA-DMH (A) och LHA (B) uttryckte cFos efter alla parametrar av parningsbeteende hos naiva och erfarna djur. Förkortningar: HC, hembur; AF: anestrous kvinna; EF, östlig kvinna; M, Mount; IM, Intromission; E, ejakulation. .

Effekter av orexin lesioner

Sexuellt beteende

Orexin-lesioner resulterade i underlättande av sexuellt beteende (monterings latens: F(2,47) 3.962; p = 0.034; intromissions latens: H = 9.104; p = 0.011). Under den första parningstestet visade lesionsmanar kortare latenser för montering och intromission jämfört med skamdjur (monterings latens: p = 0.03; intromissions latens: p = 0.01; Figur 4a-b) och jämfört med latenser under pre-kirurgi parningstestet (monterings latens: p = 0.02; intromission latens: p = 0.03; Data ej visad). Delvis lesion hanar skilde sig inte signifikant från sham hanar, och ingen grupp skilde sig från pre-kirurgi parning test. Effekter av skador på berggrund och intromission latenser dämpades med sexuell erfarenhet, eftersom det inte fanns några skillnader mellan grupper under några av de efterföljande försöken (prov 4 visad i Figur 4a-b). Ejakulations latenser (Figur 4c), antal fästen (Figur 4d) och intromissioner (Figur 4e) samt samverkningseffektivitet (Figur 4f) skilde sig inte signifikant mellan grupper under någon av försöken eller inom varje grupp mellan den första parningstestet och före-kirurgiska testet.

Figur 4 

Orexin lesioner förkortade latenser för montering och intromission hos sexuellt naiva män under försöken 1. Orexin-skador påverkade inte parning under försöken 4, efter att männen fick sexuell erfarenhet. (A) Mount Latency. (B) Intromissions latens. (C) ejakulation .
Runway test

Orexin-lesioner påverkar inte sexuell motivation bedömd i ett rakt bana test hos sexuellt erfarna män. Under loppet av två försöksförsök sprang lesionsmännen betydligt snabbare mot en östlig kvinna i den andra försöken jämfört med den första försöket (p = 0.03; Figur 5). Sådan ökad körtid är en indikation på sexuell motivation (Lopez et al., 1999). Delvis lesion och skam hanar sprang också snabbare mot en östlig kvinna under försöken 2 (p = 0.03), även om detta inte lyckades nå signifikans hos skammanar (p = 0.052). Ingen av grupperna visade ökad hastighet för att köra mot en anestrous kvinna eller en man under provning 2. Vidare observerades inga signifikanta skillnader mellan skam-, partiella och lesions-män på hastighet att springa mot något stimulusdjur på varken försök 1 eller test 2, vilket visade brist på skillnader i allmän aktivitet på banan.

Figur 5 

Orexin-lesioner påverkar inte sexuell motivation hos män med sexuell erfarenhet. Visad är tider för att nå en östlig kvinna i bananprovet under båda försöken 1 och 2. * indikerar signifikant minskning av tiden för att nå kvinnan i försök 2 jämfört med .
Ångestliknande beteende

Resultat hittills föreslår att lesioner kan underlätta initiering av sexuellt beteende hos naiva djur via en potentiell effekt på respons på nyhet och / eller ångestliknande beteenden när männen möter en ny kvinna. I stöd visade lesionar män minskat ångestliknande beteende på EPM, sedd som en minskad andel av tiden som spenderades i de slutna armarna, (p = 0.012; Figur 6) och en ökad andel tid på de öppna armarna (p = 0.023; Figur 6) jämfört med sham hannar. Delvisa skador hade ingen signifikant effekt. Dessa data stödjer vidare att skadorna minskade ångestliknande beteende.

Figur 6 

Orexin-lesioner minskade ångestliknande beteende på den förhöjda plus labyrinten. Andelen tid i slutna armar (vänster) minskade och procentuell andel tid i öppna armar (höger) ökade hos lesionerade män. * indikerar signifikant skillnad .
cFos-uttryck

För att bedöma huruvida endogen orexin bidrar till parning-inducerad neuronaktivisering i orexin-innervade hjärnregioner, genomfördes analys av parning-inducerad cFos-expression i VTA, NAc-kärnan och skalet, mPOA och mPFC. I både lesions- och sham-män ökade parningen signifikant cFos i alla de analyserade hjärnområdena jämfört med icke-kontrollerade kontroller (Tabell 2). Lesioner påverkar inte neuralt aktivering, eftersom skam och lesionsdjur inte skilde sig i baslinje eller parning-inducerad cFos-expression.

Tabell 2 

Parning inducerad cFos i skam, partiella och lesionsgrupper jämfört med icke-parande kontroller med samma lesionsstatus.

Diskussion

Dessa studier undersökte rollen som endogen orexin vid sexuell prestation och motivation hos hanrotten. Det visade sig att orexin inte är nödvändigt för sexuell motivation eller prestanda. Istället aktiveras orexin-neuroner av kvinnostimulans, oberoende av den hormonella statusen hos kvinnans kvinnliga eller sexuella erfarenhet. Vidare minskade avlägsnandet av endogent orexin med orexincellspecifika lesioner ångestliknande beteenden och underlättat initiering av sexuellt beteende hos sexuellt naiva män. Resultaten av denna studie stöder således en roll för orexin vid upphetsning (de Lecea et al., 2006; Harris och Aston-Jones, 2006; Sakurai, 2007; Boutrel et al., 2009; Furlong och Carrive, 2009; Furlong et al., 2009) och ångest (Suzuki et al., 2005; Davis et al., 2009; Li et al., 2010), men stöder inte en kritisk roll för orexin i sexuell motivation eller prestanda.

Resultaten av dessa studier klargör vidare rollen för endogen orexin och de uppenbara kontrasterande resultaten från tidigare studier som undersöker rollen av orexin hos manligt sexuellt beteende med användning av farmakologiska verktyg. Intra-mPOA-infusioner av exogent orexin-A ledde till ökad sexuell upphetsning och förbättrad sexuell prestanda, vilket tyder på att orexin kan agera i mPOA för att öka motivationen och resultatet av sexuellt beteende (Gulia et al., 2003). I motsats härtill dämpade ICV-infusioner av orexin-A sexuell motivation och upphetsning (Bai et al., 2009), medan en orexinreceptorantagonist inte hade någon effekt på sexuell upphetsning (Bai et al., 2009), som indikerar endogen orexin får inte spela en roll i sexuell motivation. Slutligen visade sig ORX1-blockad genom systemiska injektioner att endast svagt försämra sampulatorisk prestanda (Muschamp et al., 2007). Från dessa motstridiga studier kan några slutsatser dras. För det första kan applicering av exogent orexin-A påverka beteendet, men ORX1-blockaden är utan större effekter, vilket tyder på en mindre roll för endogen orexin vid reglering av manligt sexuellt beteende (Bai et al., 2009). De nuvarande resultaten stöder denna möjlighet. De nuvarande studierna som använder borttagning av orexin, genom orexinspecifika lesioner visar att endogen orexin inte är nödvändig för sexuell motivation eller prestanda, i linje med observationer av Bai et al (2009). Det är emellertid viktigt att notera att brist på effekter av orexinskador på sexuell motivation i banan kan bero på att djur hade fått sexuell erfarenhet före sexuell motivationstestning, därför kan brist på effekt i banktestet ha varit förfallet till sexuell upplevelse av männen. Framtida experiment kan ta itu med denna försiktighet genom att testa effekterna av orexin lesioner på sexuell motivation hos naiva män.

Det är också möjligt att de två orexinliganderna och de två subtyperna av orexinreceptorer (ORX1 och ORX2; Sakurai et al., 1998) kan reglera sexuellt beteende i motsatta riktningar. Genom att använda orexincelllektionstekniker eliminerades liganderna för båda subtyperna av orexinreceptorer (orexin-A och B) i den aktuella studien. De två receptorundertyperna uttrycks i olika hjärnområden (Trivedi et al., 1998; Marcus et al., 2001) och har visats att differentiellt reglera minnet för cue-inducerad kokain-sökande (Smith et al., 2009). Tidigare studier om sexuellt beteende har främst inriktat sig på orexin-A och ORX1 (se ovanstående diskussion). Orexinreceptorantagonisten SB334867 som används i studierna hittills specifikt riktar mot ORX1, som har en hög affinitet för orexin-A och signifikant lägre affinitet för orexin-B (Sakurai et al., 1998). På samma sätt har orexin-A använts som exogen orexin i tidigare studier (Gulia et al., 2003; Bai et al., 2009). Framtida studier behövs för att undersöka rollen som orexin-B och ORX2 i regleringen av manligt sexuellt beteende.

Den aktuella studien testade effekterna av långvarig förlust av orexin. Muschamp et al. (2007) föreslog att en långsiktig minskning av orexin efter kastration kan stå för förlusten av sexuell motivation och prestanda. Denna hypotes motsäges av de aktuella resultaten eftersom orexincellskador inte minskade sexuell motivation eller prestanda. Det är möjligt att den långsiktiga orexinförlusten i den aktuella studien kan ha resulterat i kompensationsmekanismer, även om inga förändringar i parning-inducerad neuralaktivering inom kretsmedierande sexuellt beteende detekterades. Det är emellertid klart att reducerad eller brist på orexin inte förhindrar sexuellt beteende. Dessutom stöder resultaten från den aktuella studien inte en viktig roll för orexin vid induktion av cFos-uttryck genom sexuellt beteende. Det har tydligt fastställts att orexin bidrar till aktivering av neuroner i VTA (Korotkova et al., 2003; Borgland et al., 2006; Narita et al., 2006; Vittoz et al., 2008). Emellertid blockerade orexincellskador inte parningsinducerad neural aktivering i VTA eller i några andra belöningsrelaterade hjärnområden som analyserats, trots närvaron av orexinimmunreaktiva fibrer i närheten av de aktiverade neuronerna i skamhumor. Sålunda verkar parning-inducerad neural aktivering i dessa hjärnregioner inte vara beroende av orexinverkan.

Ett något oväntat konstaterande av den aktuella studien var effekten av orexin-lesioner för att underlätta initiering av sexuellt beteende hos sexuella naiva men inte erfarna djur. Detta visade sig vara korrelerat med en minskning av ångestliknande beteenden. Därför kan effekterna av orexin-lesioner på sexuell motivation och prestanda vara sekundära till dess effekter på ångest och upphetsning. Faktiskt tidigare studier har föreslagit en roll för orexin i ångest som ICV-infusion av orexin-A-minskad tid på EPM: s öppna armar i möss (Suzuki et al., 2005). Infusion av orexin-A i den paraventrikulära kärnan i thalamus hos hanrotter minskade tiden som spenderades i mitten av en öppen fältkammare och minskad romanobjektutforskning, vilket indikerar orexin kan vara involverat i genereringen av ångestliknande beteende (Li et al., 2010). Dessutom dominerande hanrotter som visar ökad risk att ta på EPM har ökat nivåer av ORX1 mRNA i mPFC (Davis et al., 2009). Orexin har också visat sig förändra respons på stress (Ida et al., 1999; Ida et al., 2000) och stimulering av orexinreceptorer ökar frisättningen av kortikotropinfrisättande faktor (Al-Barazanji et al., 2001; Singareddy et al., 2006), kortikosteron (Ida et al., 2000; Kuru et al., 2000) och adrenokortikotropiskt hormon (Kuru et al., 2000). Orexin-antagonister är för närvarande i kliniska prövningar för behandling av sömnlöshet, en sjukdom som ofta är comorbid med ångestsjukdomar (Sullivan och Neria, 2009), och det är hypotes att orexinantagonister potentiellt kan användas för att behandla ångeststörningar (Mathew et al., 2008). Med tanke på den växande bevisuppgiften om orexins roll vid ångest och upphetsning förefaller det att orexinskador kan underlätta initieringen av sexuellt beteende hos naiva män genom att minska ångestliknande svar i samband med införandet av en ny stimulans, dvs honan.

Signifikant aktivering av orexin-neuroner ses efter sexuell upphetsning och sexuellt beteende hos både sexuellt naiva och erfarna djur i både PFA-DMH och LHA, med 60-80% och 14-33% av orexinceller som uttrycker cFos. Det finns en mängd bevis som stöder en dikotomi i orexin-neuronfunktionen inom orexincellpopulationen, med PFA-DMH som är kritiskt inblandad i upphetsning och LHA är kritisk för belöningsrelaterade beteenden (Harris et al., 2005; Harris och Aston-Jones, 2006, Aston-Jones, 2009a). Aktivering av PFA-DMH-orexincellerna med kvinnostimulansen stöder därför hypotesen att orexin aktiveras av och är kritisk för upphetsning, inklusive sexuell upphetsning hos naiva och erfarna män och ångest i samband med den nya kvinnliga stimulansen hos naiva män. PFA-DMH-celler aktiverades emellertid till liknande nivåer oberoende av upplevelsen av männen och kvinnans hormonella status, vilket tyder på att PFA-DMH-cellerna aktiverades under generell upphetsning och inte specifikt av sexuell upphetsning. Dessutom stöder våra studier inte fullständigt existensen av en helt dikotom orexincellpopulation eftersom det var signifikant aktivering av LHA efter exponering för alla parametrar av sexuellt upphetsning och prestanda, oavsett om beteenden var förknippade med belöning. Sålunda uppvisade erfarna män utsatta för en anestrogen kvinna lika stora nivåer av orexincellaktivering i LHA jämfört med erfarna män som copulerades till utlösning. Dock kommer endast den senare gruppen att bilda en konditionerad platspreferens för parning (Tenk et al, 2009); vilket tyder på att sammansättning till utlösning är mer givande än andra delar av parning. I den aktuella studien testades inte specifikt orexins roll i sexuell belöning; Därför behövs framtida studier för att ta itu med den frågan.

Sammanfattningsvis visar resultaten från dessa studier att orexin inte är kritisk för sexuell prestation eller motivation. Istället demonstrerades orexincellskador för att minska ångest, vilket tyder på att endogen orexin är involverad i ökande ångest. Vidare resulterade avlägsnandet av orexin i att underlätta sexuellt beteende hos sexuellt naiva män, vilket tyder på att endogen orexin kan hämma initiering av parning, möjligen genom att öka ångest som svar på den nya stimulansen, dvs kvinnan. Dessa resultat belyser vidare neurala kretsloppet som är inblandat i sexuell prestation och ångest och lägger till en växande kropp av litteratur om orexins roll i förmedling av upphetsning och ångest.

Tack

Denna forskning stöddes av bidrag från National Institute of Health (R01 DA014591), kanadensiska institut för hälsoforskning (RN 014705) och Canadian Research Council of Canada (Discovery Grant (341710) till LMC.

fotnoter

Ansvarsfriskrivning för förlag: Detta är en PDF-fil av ett oediterat manuskript som har godkänts för publicering. Som en tjänst till våra kunder tillhandahåller vi denna tidiga version av manuskriptet. Manuskriptet kommer att genomgå copyediting, uppsättning och granskning av det resulterande beviset innan det publiceras i sin slutliga formulär. Observera att under tillverkningsprocessen kan det upptäckas fel som kan påverka innehållet och alla juridiska ansvarsfrister som gäller för tidskriften avser.

Referensprojekt

  1. Agmo A. Mänskliga råttor sexuellt beteende. Brain Res Brain Res Protoc. 1997; 1: 203-209. [PubMed]
  2. Al-Barazanji KA, Wilson S, Baker J, Jessop DS, Harbuz MS. Central orexin-A aktiverar hypotalamus-hypofys-adrenalaxeln och stimulerar hypotalamisk kortikotropinfrigörande faktor och argininvasopressin-neuroner i medvetna råttor. J Neuroendokrinol. 2001; 13: 421-424. [PubMed]
  3. Aston-Jones G, Smith RJ, Moorman DE, Richardson KA. Roll av laterala hypotalamiska orexinneuroner i belöningsprocesser och missbruk. Neuro. 2009a; 56 Suppl 1: 112-121. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  4. Aston-Jones G, Smith RJ, Sartor GC, Moorman DE, Massi L, Tahsili-Fahadan P, Richardson KA. Lateral hypotalamisk orexin / hypokretinneuroner: En roll i belöningssökande och beroende. Brain Res. 2009b; 1314: 74-90. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  5. Bai YJ, Li YH, Zheng XG, Han J, Yang XY, Sui N. Orexin A dämpar okonditionerad sexuell motivation hos hanrotter. Pharmacol Biochem Behav. 2009; 91: 581-589. [PubMed]
  6. Bäckberg M, Hervieu G, Wilson S, Meister B. Orexinreceptor-1 (OX-R1) immunreaktivitet i kemiskt identifierade neuroner i hypotalamus: fokus på orexinmål inblandade i kontroll av mat och vattenintag. Eur J. Neurosci. 2002; 15: 315-328. [PubMed]
  7. Baldo BA, Daniel RA, Berridge CW, Kelley AE. Överlappande fördelningar av immunreaktiva fibrer av orexin / hypokretin och dopamin-beta-hydroxylas i råtthinnesregioner som medierar upphetsning, motivation och stress. J Comp Neurol. 2003; 464: 220-237. [PubMed]
  8. Balfour ME, Yu L, Coolen LM. Sexuellt beteende och könsrelaterade miljöanpassningar aktiverar mesolimbic systemet hos hanrotter. Neuropsychopharmacology. 2004; 29: 718-730. [PubMed]
  9. Benoit SC, Tracy AL, Davis JF, Choi D, Clegg DJ. Nya funktioner hos orexigeniska hypotalamiska peptider: från gener till beteende. Näring. 2008; 24: 843-847. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  10. Borgland SL, Taha SASF, Fields HL, Bonci A. Orexin A i VTA är avgörande för induktionen av synaptisk plasticitet och beteendets sensibilisering mot kokain. Nervcell. 2006; 49 (4): 589-601. [PubMed]
  11. Boutrel B, Cannella N, de Lecea L. Hypocretins roll i körupphetsning och målorienterat beteende. Brain Res. 2009 [PMC gratis artikel] [PubMed]
  12. Boutrel B, Kenny PJ, Specio SE, Martin-Fardon R, Markou A, Koob GF, de Lecea L. Rollen för hypocretin vid förmedling av stressinducerade återupptagande av kokainsökande beteende. Proc Natl Acad Sci USA A. 2005; 102: 19168-19173. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  13. Broberger C, De Lecea L, Sutcliffe JG, Hokfelt T. Hypocretin / orexin- och melaninkoncentrerande hormonuttryckande celler bildar distinkta populationer i den laterala hypotalamusen hos gnagare: förhållande till neuropeptid Y- och agouti-genrelaterade proteinsystem. J Comp Neurol. 1998; 402: 460-474. [PubMed]
  14. Carter ME, Borg JS, de Lecea L. Hjärnhypokretinerna och deras receptorer: mediatorer av allostatisk upphetsning. Curr Opin Pharmacol. 2009; 9: 39-45. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  15. Chemelli RM, Willie JT, Sinton CM, Elmquist JK, Scammell T, Lee C, Richardson JA, Williams SC, Xiong Y, Kisanuki Y, Fitch TE, Nakazato M, Hammer RE, Saper CB, Yanagisawa M. Narcolepsy i orexin knockout möss : molekylärgenetik av sömnreglering. Cell. 1999; 98: 437-451. [PubMed]
  16. Chen CT, Dun SL, Kwok EH, Dun NJ, Chang JK. Orexin A-liknande immunreaktivitet i råtthjärnan. Neurosci Lett. 1999; 260: 161-164. [PubMed]
  17. Choi DL, Davis JF, Fitzgerald ME, Benoit SC. Orexin-A: s roll i matmotivation, belöningsbaserat utfodringsbeteende och matinducerad neuronal aktivering hos råttor. Neuroscience. 2010; 167: 11-20. [PubMed]
  18. Davis JF, Krause EG, Melhorn SJ, Sakai RR, Benoit SC. Dominerande råttor är naturliga riskmakare och visar ökad motivation för matbelöning. Neuroscience. 2009; 162: 23-30. [PubMed]
  19. de Lecea L, Jones BE, Boutrel B, Borgland SL, Nishino S, Bubser M, DiLeone R. Addiction and arousal: Alternativa roller av hypotalamiska peptider. J. Neurosci. 2006; 26 (41): 10372-10375. [PubMed]
  20. De Lecea L, Kilduff TS, Peyron C, Gao X, Foye PE, Danielson PE, Fukuhara C, Battenberg EL, Gautvik VT, Bartlett FS, 2nd, Frankel WN, van den Pol AN, Bloom FE, Gautvik KM, Sutcliffe JG. Hypocretinerna: hypotalamusspecifika peptider med neuroexititiv aktivitet. Proc Natl Acad Sci USA A. 1998; 95: 322-327. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  21. Dewsbury DA. Råtta hos råttor (Rattus norvegicus) som en funktion av tidigare copulatorisk erfarenhet. Anim Behav. 1969; 17: 217-223. [PubMed]
  22. Fadel J, Deutch AY. Anatomiska substrat av orexin-dopamin-interaktioner: laterala hypotalamiska utsprång i ventral tegmentalområdet. Neuroscience. 2002; 111: 379-387. [PubMed]
  23. Frederick-Duus D, Guyton MF, Fadel J. Matframkallad ökning av kortikal acetylkolinfrisättning kräver orexinöverföring. Neuroscience. 2007; 149: 499-507. [PubMed]
  24. Furlong TM, Carrive P. Neurotoxiska lesioner centrerade på perifornisk hypotalamus avskaffa kardiovaskulära och beteendemässiga reaktioner av konditionerad rädsla för sammanhang men inte av fasthållning. Brain Res. 2007; 1128: 107-119. [PubMed]
  25. Furlong TM, Vianna DM, Liu L, Carrive P. Hypokretin / orexin bidrar till uttrycket av vissa men inte alla former av stress och upphetsning. Eur J Neurosci. 2009; 8: 1603-1614. [PubMed]
  26. Gerashchenko D, Kohls MD, Greco M, Waleh NS, Salin-Pascual R, Kilduff TS, Lappi DA, Shiromani PJ. Hypocretin-2-saporin-lesioner av lateral hypotalamus producerar narkoleptiskt liknande sömnbeteende hos råtta. J Neurosci. 2001; 21: 7273-7283. [PubMed]
  27. Gulia KK, Mallick HN, Kumar VM. Örexin A (hypocretin-1) -ansökan på det mediala preoptiska området förstärker manligt sexuellt beteende hos råttor. Neuroscience. 2003; 116: 921-923. [PubMed]
  28. Hagan JJ, Leslie RA, Patel S, Evans ML, Wattam TA, Holmes S, Benham CD, Taylor SG, Routledge C, Hemmati P, Munton RP, Ashmeade TE, Shah AS, Hatcher JP, Hatcher PD, Jones DN, Smith MI , Piper DC, Hunter AJ, Porter RA, Upton N. Orexin A aktiverar locus coeruleus cellbränning och ökar upphetsning i råttan. Proc Natl Acad Sci USA A. 1999; 96: 10911-10916. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  29. Harris GC, Aston-Jones G. Arousal och belöning: en dikotomi i orexin funktion. Trender Neurosci. 2006; 29: 571-577. [PubMed]
  30. Harris GC, Wimmer M, Aston-Jones G. En roll för laterala hypotalamiska orexinneuroner i belöningssökande. Natur. 2005; 437 (7058): 556-559. [PubMed]
  31. Horvath TL, Peyron C, Diano S, Ivanov A, Aston-Jones G, Kilduff TS, van Den Pol AN. Hypokretin (orexin) aktivering och synaptisk innervation av det lokus coeruleus noradrenerga systemet. J Comp Neurol. 1999; 415: 145-159. [PubMed]
  32. Ida T, Nakahara K, Katayama T, Murakami N, Nakazato M. Effekt av lateral cerebroventrikulär injektion av aptitstimulerande neuropeptid, orexin och neuropeptid Y, på de olika beteendeaktiviteten hos råttor. Brain Res. 1999; 821: 526-529. [PubMed]
  33. Ida T, Nakahara K, Murakami T, Hanada R, Nakazato M, Murakami N. Eventuellt involverande av orexin i stressreaktionen hos råttor. Biochem Biophys Res Commun. 2000; 270: 318-323. [PubMed]
  34. Korotkova TM, Sergeeva OA, Eriksson KS, Haas HL, Brown RE. Excitation av ventral tegmental area dopaminerga och nondopaminerga neuroner med orexiner / hypokretiner. J Neurosci. 2003; 23 (1): 7-11. [PubMed]
  35. Kuru M, Ueta Y, Serino R, Nakazato M, Yamamoto Y, Shibuya I, Yamashita H. Centralt administrerad orexin / hypokretin aktiverar HPA-axeln hos råttor. Neuroreport. 2000; 11: 1977-1980. [PubMed]
  36. Li Y, Li S, Wei C, Wang H, Sui N, Kirouac GJ. Förändringar i känslomässigt beteende som produceras av orexin-mikroinjektioner i thalamus paraventrikulära kärna. Pharmacol Biochem Behav. 2010; 95: 121-128. [PubMed]
  37. Lin L, Faraco J, Li R, Kadotani H, Rogers W, Lin X, Qiu X, de Jong PJ, Nishino S, Mignot E. Sömnförstöringskanan narkolepsin orsakas av en mutation i hypokretin (orexin) receptorn 2-genen . Cell. 1999; 98: 365-376. [PubMed]
  38. Lopez HH, Olster DH, Ettenberg A. Sexuell motivation i manrotten: Primära incitament och samverkande erfarenhet. Horm Behav. 1999; 36: 176-185. [PubMed]
  39. Marcus JN, Aschkenasi CJ, Lee CE, Chemelli RM, Saper CB, Yanagisawa M, Elmquist JK. Differentiellt uttryck av orexinreceptorer 1 och 2 i råtthjärnan. J Comp Neurol. 2001; 435: 6-25. [PubMed]
  40. Martin G, Fabre V, Siggins GR, de Lecea L. Interaktion av hypocretinerna med neurotransmittorer i kärnan accumbens. Regelbunden. 2002; 104: 111-117. [PubMed]
  41. Mathew SJ, Pris RB, Charney DS. Nyliga framsteg inom neurobiologi av ångestsjukdomar: konsekvenser för nya terapeutiska medel. Am J Med Genet C Semin Med Genet. 2008; 148C: 89-98. [PubMed]
  42. Muschamp JW, Dominguez JM, Sato SM, Shen RY, Hull EM. En roll för hypokretin (orexin) hos manligt sexuellt beteende. J Neurosci. 2007; 27: 2837-2845. [PubMed]
  43. Nair SG, Golden SA, Shaham Y. Differentiella effekter av hypokretin 1-receptorantagonisten SB 334867 på självmottagning med hög fetthalt och återinförande av mat som söker hos råttor. Br J Pharmacol. 2008; 154: 406-416. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  44. Narita M, Nagumo Y, Hashimoto S, Khotib J, Miyatake M, Sakurai T, Yanagisawa M, Nakamachi T, Shioda S, Suzuki T. Direkt involvering av orexinerga system vid aktivering av mesolimbisk dopaminväg och relaterat beteende inducerat av morfin. J Neurosci. 2006; 26: 398-405. [PubMed]
  45. Nishino S, Ripley B, Overeem S, Lammers GJ, Mignot E. Hypokretin (orexin) brist i human narkolepsi. Lansett. 2000; 355: 39-40. [PubMed]
  46. Paxinos G, Watson C. Råttahjärnan i stereotaxiska koordinater. San Diego, CA: Academic Press; 1998.
  47. Peyron C, Faraco J, Rogers W, Ripley B, Overeem S, Charnay Y, Nevsimalova S, Aldrich M, Reynolds D, Albin R, Li R, Hungs M, Pedrazzoli M, Padigaru M, Kucherlapati M, Fan J, Maki R , Lammers GJ, Bouras C, Kucherlapati R, Nishino S, Mignot E. En mutation i fallet av tidigt inledande narkolepsi och en generaliserad frånvaro av hypokretinpeptider i humana narkoleptiska hjärnor. Nat Med. 2000; 6: 991-997. [PubMed]
  48. Peyron C, Tighe DK, van den Pol AN, de Lecea L, Heller HC, Sutcliffe JG, Kilduff TS. Neuroner som innehåller hypokretin (orexin) projekt till flera neuronala system. J Neurosci. 1998; 18: 9996-10015. [PubMed]
  49. Sakurai T. Roller av orexiner och orexinreceptorer i central reglering av utfodringsbeteende och energihemostas. CNS Neurol Disord Drug Mål. 2006; 5: 313-325. [PubMed]
  50. Sakurai T. Den neurala kretsen av orexin (hypocretin): upprätthålla sömn och vakenhet. Nat Rev Neurosci. 2007; 8: 171-181. [PubMed]
  51. Sakurai T, Amemiya A, Ishii M, Matsuzaki I, Chemelli RM, Tanaka H, ​​Williams SC, Richardson JA, Kozlowski GP, Wilson S, Arch JR, Buckingham RE, Haynes AC, Carr SA, Annan RS, McNulty DE, Liu WS , Terrett JA, Elshourbagy NA, Bergsma DJ, Yanagisawa M. Orexiner och orexinreceptorer: en familj av hypotalamusneuropeptider och G-proteinkopplade receptorer som reglerar foderbeteende. Cell. 1998; 92: 573-585. [PubMed]
  52. Satoh S, Matsumura H, Fujioka A, Nakajima T, Kanbayashi T, Nishino S, Shigeyoshi Y, Yoneda H. FOS uttryck i orexinneuroner efter muscimolperfusion av preoptisk area. Neuroreport. 2004; 15: 1127-1131. [PubMed]
  53. Siegel JM. Narkolepsi: En nyckelroll för hypocretiner (orexiner) Cell. 1999; 98: 409-412. [PubMed]
  54. Singareddy R, Uhde T, Commissaris R. Differentiella effekter av hypocretiner på buller-ensam mot potentierade startle responser. Physiol Behav. 2006; 89: 650-655. [PubMed]
  55. Smith RJ, se RE, Aston-Jones G. Orexin / hypokretinsignalering vid orexin 1-receptorn reglerar cue-framkallad kokain-sökande. Eur J Neurosci. 2009; 30: 493-503. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  56. Solomon A, De Fanti BA, Martinez JA. Perifert ghrelin interagerar med orexin-neuroner vid glukostatisk signalering. Regelbunden. 2007; 144: 17-24. [PubMed]
  57. Sullivan GM, Neria Y. Farmakoterapi vid posttraumatisk stressstörning: Bevis från randomiserade kontrollerade studier. Curr Opin Investig Drugs. 2009; 10: 35-45. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  58. Suzuki M, Beuckmann CT, Shikata K, Ogura H, Sawai T. Orexin-A (hypokretin-1) är möjligen involverad i generering av ångestliknande beteende. Brain Res. 2005; 1044: 116-121. [PubMed]
  59. Tenk CM, Wilson H, Zhang Q, Pitchers KK, Coolen LM. Sexuell belöning hos hanrotter: effekter av sexuell erfarenhet på konditionerade platspreferenser i samband med utlösning och intromissioner. Horm Behav. 2009; 55: 93-97. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  60. Thannickal TC, Moore RY, Nienhuis R, Ramanathan L, Gulyani S, Aldrich M, Cornford M, Siegel JM. Minskat antal hypokretinneuroner i human narkolepsi. Nervcell. 2000; 27: 469-474. [PubMed]
  61. Thorpe AJ, Cleary JP, Levine AS, Kotz CM. Centralt administrerad orexin A ökar motivationen för söta pellets hos råttor. Psykofarmakologi (Berl) 2005; 182: 75-83. [PubMed]
  62. Trivedi P, Yu H, MacNeil DJ, Van der Ploeg LH, Guan XM. Distribution av orexinreceptor-mRNA i råtthjärnan. FEBS Lett. 1998; 438: 71-75. [PubMed]
  63. Vittoz NM, Schmeichel B, Berridge CW. Hypokretin / orexin aktiverar företrädesvis kaudomediala ventrala tegmentala area-dopaminneuroner. Eur J Neurosci. 2008; 28: 1629-1640. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  64. Volgin DV, Swan J, Kubin L. Enkeltcell RT-PCR genuttryck profilering av akut. dissocierade och immunocytokemiskt identifierade centrala neuroner. J. Neurosci Methods. 2004; 136: 229-236. [PubMed]