Variação na densidade de receptores de oxitocina no Núcleo Accumbens tem efeitos diferenciais sobre comportamentos afiliativos em ratos monogâmicos e poligâmicos (2009)

Heather E. Ross,¹ Sara M. Freeman,¹ Lauren L. Spiegel,¹ Xianghui Ren,² Ernest F. Terwilliger,² e Larry J. Young^1,3

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Os receptores de ocitocina no nucleus accumbens têm sido implicados na regulação do comportamento aloparental e na formação de vínculos emparelhados na ratazana de pradaria socialmente monogâmica. A densidade de receptores de ocitocina no nucleus accumbens está positivamente correlacionada com a aloparentalização em fêmeas de pradaria juvenis e adultas, e o antagonista do receptor de ocitocina infundido no nucleus accumbens bloqueia esse comportamento. Além disso, as pradarias do campo apresentam maiores densidades de receptores de ocitocina no acumbens do que as espécies não-monogâmicas de roedores, e o bloqueio dos receptores de oxitocina no organismo previne a formação de preferências de parceiros induzidas pelo acasalamento. Aqui utilizamos a transferência de genes do vetor viral adeno-associado para examinar a relação funcional entre a densidade de receptores de oxitocina e o comportamento social em prados e prados. Ratazanas de pradarias fêmeas adultas que superexpressam o receptor de ocitocina no núcleo accumbens exibiram formação de preferência de parceiro acelerada após coabitação com um macho, mas não exibiram um comportamento aloparental melhorado. No entanto, a preferência do parceiro não foi facilitada em ratos não monogâmicos introduzindo o receptor de ocitocina no núcleo accumbens. Esses dados confirmam o papel do receptor de ocitocina no acumbente na regulação das preferências dos parceiros em fêmeas de pradaria e sugerem que a expressão do receptor de ocitocina no acumbente não é suficiente para promover preferências de parceiros em espécies não monogâmicas. Esses dados são os primeiros a demonstrar uma relação direta entre a densidade de receptores de ocitocina no nucleus accumbens e a variação nos comportamentos de apego social. Assim, a variação individual na expressão do receptor de ocitocina no estriado pode contribuir para a diversidade natural nos comportamentos sociais.

Animais

As ratazanas da pradaria e do prado foram alojadas em grupos do mesmo sexo com ratazanas 2-3 / gaiola desde o momento do desmame aos 21-23 dias de idade. A carcaça consistia de uma gaiola de 36 × 18 × 19cm preenchida com Bed-ocobbs Laboratory Animal Bedding sob um ciclo 14: 10 hr luz / escuridão a 22 ° C com acesso a alimentos (coelho LabDiet, Richmond, IN) e água ad libitum . Os ratos da pradaria foram obtidos de nossa colônia de reprodução de laboratório que originalmente derivou de ratos capturados no campo em Illinois. Os ratos-do-campo foram derivados do estoque obtido de uma colônia de reprodução na Universidade Estadual da Flórida. Os sujeitos foram 2-5, machos sexualmente ingênuos, sexualmente ingênuos e íntegros. Os animais de estímulo eram ratos machos adultos com experiência sexual. Cada macho serviu como “parceiro” e “estranho” durante o teste de preferência do parceiro (veja abaixo). As ninhadas foram designadas para diferentes grupos de tratamento para controlar a variabilidade dentro de ninhadas e dentro de gaiolas. Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso Animal da Emory University.

Vetores Virais Adeno-Associados

A sequência codificadora de OTR foi criada por splicing do primeiro exon de um clone genômico OTR de ratazana da pradaria codificando os primeiros cinco domínios transmembranares (número de acesso do Genbank AF079980) e o extremo 3 do OTR amplificado a partir do cDNA do véu do vau da pradaria. A sequcia de codificao foi reclassificada utilizando PCR para eliminar as UTRs e proporcionar novos locais de restrio flanqueadores para facilitar a clonagem no plasmeo vector AAV. O gene modificado foi ent clonado num plasmeo vector AAV2 entre um promotor de citomegalovus 0.6 kb (CMV) e um fragmento de ADN SV40 contendo o pequeno intr de SV40 e o sinal poliA. O AAV2-OTR foi empacotado em cruz em AAV9 por uma transfeco tripla de plasmeo em culas AAV-293 (Stratagene, La Jolla, CA) utilizando um modo padr de precipitao com fosfato de ccio. Nenhum vírus auxiliar foi empregado. Um plasmídeo AAV2-eGFP foi empacotado em paralelo em AAV9 como um vetor de controle negativo. Resumidamente, cada plasmídeo vector AAV, um plasmídeo AAV2 / 9 rep / cap que fornece as funções da cápside AVA2 e AAV9, e um 3^rd o plasmídeo que codifica as funções auxiliares de adenovírus, pHelper (Stratagene), foi co-transfectado em células 293 numa razão molar de 1: 1: 1. As células foram colhidas 48 horas após a transfecção. Os sedimentos de células foram então ressuspensos em DMEM, e as partículas de vírus intracelulares libertadas por três ciclos consecutivos de congelação-descongelação, seguido por centrifugação a 13,000 rpm para 10 min numa centrífuga de mesa para remover partículas. Os estoques vetoriais foram armazenados em –80 C e titulados por PCR em tempo real usando um Sistema de Detecção de Sequência ABI Prism 7700 da Perkin-Elmer Applied Biosystems (Foster City, CA). Os títulos estavam na ordem de 10¹² DRP / ml. (DRP = Partículas Resistentes a Dnase).

Infusão de vetores virais

Infusões estereotáxicas foram realizadas sob anestesia com isoflurano em um estereotax Kopf equipado com um Ultra Micro Pump II (World Precision Instruments, Sarasota, FL) e uma seringa Hamilton de calibre 26. As fêmeas foram injetadas bilateralmente na concha do NAcc (pradaria ratazana: AP + 1.7mm, ML .9mm, DV-4.5mm, camundongos: AP + 1.6mm, ML .9mm, DV-4.3mm) com 750nl de um AAV contendo a ratazana receptor de oxitocina (CMV-OTR, N = 12), ou um vector de express eGFP de controlo (CMV-GFP, N = 16). O vírus foi infundido a uma taxa de 93.8nl / min. A seringa foi deixada no lugar por 5 min após a infusão para minimizar a difusão do vetor na trilha da agulha. Os animais operados de forma simulada (N = 9) foram anestesiados e tiveram seus escalpos incisados ​​e suturados. Após a cirurgia, os animais foram alojados em grupo até o momento do teste de comportamento de preferência do parceiro. Estudos preliminares indicaram que a expressão de OTR no local da injeção foi estável após 10 dias.

Teste de comportamento aloparental

Um mês após a injeção, os ratos-da-pradaria foram testados para comportamento aloparental. O teste ocorreu entre as 0800h1800 e as 45.5h24. Os animais de teste foram colocados em uma grande gaiola limpa (20 × 15 × 2 cm) e deixados em aclimatação por 5 minutos. Dois filhotes (900-15 dias de idade) foram colocados em uma das extremidades da gaiola. A latência para se aproximar dos filhotes, o número de animais que atacaram os filhotes e a quantidade de tempo gasto cuidando, pairando e recuperando os filhotes foram registrados. Uma latência de 30 segundos foi atribuída aos animais que não se aproximaram dos filhotes durante o teste de XNUMX minutos para fins de análise estatística. O teste era imediatamente interrompido se a fêmea atacasse os filhotes. Os animais foram classificados como aloparentais se eles passaram> XNUMX segundos lambendo os filhotes sem atacar. Com base nos resultados da experiência com ratos-do-campo, ratos-do-campo não foram testados quanto ao comportamento aloparental.

Teste de preferência de parceiros (ratazana da pradaria)

Um mês após o teste de comportamento aloparental, e dois meses após a infusão de AAV, as fêmeas receberam 4 μg de benzoato de estradiol (EB; Fisher, Pittsburgh, PA) dissolvido em 0.1ml de óleo de gergelim IP diariamente por 3 dias antes do acasalamento para induzir receptividade sexual . 16 horas após a última injeção de EB os animais foram colocados em uma gaiola limpa (28 × 17 × 12cm) com um macho adulto sexualmente experiente por 6 horas e depois retornaram ao alojamento do grupo. O comportamento de acasalamento foi registrado durante a coabitação inicial da hora 6. A latência para a primeira intromissão e o número de ataques de acasalamento na primeira hora foram pontuados. Uma latência de 3600 segundos foi atribuída a animais que não se acasalaram durante o período de 1 para fins de análise estatística. Na manhã seguinte (14 horas após a coabitação), os animais foram testados para preferência do parceiro. Em um teste de preferência de parceiro, a fêmea experimental é colocada em uma câmara central neutra de um aparato de três câmaras, no qual o parceiro é amarrado em uma câmara lateral e um novo macho “estranho” é amarrado na outra (Williams et al., 1992). O animal experimental está livre para se movimentar pelas câmaras e o tempo gasto nas proximidades de cada macho é registrado usando um sistema automatizado de quebra de vigas (Curtis e Wang, 2005b, a; Lim et al., 2007).

Um dia depois, as fêmeas foram re-pareadas com o mesmo parceiro por mais 12 horas de coabitação. As fêmeas foram então testadas novamente por uma preferência de parceiro (tempo total de contato de 18 hora). Esse paradigma de dois estágios foi usado para maximizar nossa detecção de uma facilitação do teste de preferência de parceiros, uma vez que há variabilidade no tempo limite necessário para formar uma preferência de parceiro. Os animais foram considerados como tendo uma preferência de parceiro, se eles gastaram o dobro do tempo em estreita proximidade com o parceiro em comparação com o estranho.

Teste de preferência de parceiros (ratazana de prado)

Normalmente, ratazanas da nossa colônia não formarão uma ligação de par após 24hrs de exposição de mate. Portanto, para este experimento, testes de preferência de parceiros foram realizados após uma coabitação de 24 e um adicional de 48 horas (72 horas no total). Todos os outros métodos de tratamento e teste são os mesmos acima.

Coleta e processamento de tecidos

Após os experimentos comportamentais, os animais foram decapitados após anestesia profunda com isofluorano. Cérebros foram então recolhidos e congelados em gelo seco em pó. Os cérebros foram seccionados através do NAcc na série 6 em 20μm, em um criostato, em lâminas Fisher Frost-plus. As lâminas foram armazenadas em −80C até serem utilizadas em autorradiografia.

Autoradiografia de OTR

A autorradiografia do receptor OTR foi utilizada para avaliar a ligação de OTR em animais injectados com AAV. A autorradiografia foi realizada como descrito anteriormente com ligeiras modificações (Insel et al., 1991; Wang e Young, 1997). As secções foram removidas do armazenamento de -80C, deixadas arejar, mergulhadas em 0.1% paraformaldeído em solução salina tamponada com fosfato (pH 7.4) e enxaguadas duas vezes em tampão 50 mM Tris (pH 7.4) para remover OT endógeno. Em seguida, o tecido foi incubado em 50 pM ¹²⁵I-OVTA (NEX 254050UC PerkinElmer, Waltham, MA) por uma hora. O radioligando não ligado foi removido por quatro lavagens em 50mM Tris mais 2% MgCl₂ (pH 7.4) e depois mergulhado em dH₂0 e ar seco sob uma corrente de ar frio. Depois de secas, as lâminas foram expostas ao filme BioMax MR (Kodak, Rochester, NY) por 72 horas. Dois animais CMV-OTR e um CMV-GFP foram excluídos da análise comportamental devido a falta de injeção.

Imuno-histoquímica GFP

Um subgrupo de animais (N = 5) injectados com CMV-GFP foi perfundido transcardiamente com 50 ml de PBS, seguido por 50 ml de 4% paraformaldeído em tampão de fosfato 0.1 M contendo 2.5% acroleína (Polysciences, Warrington, PA). Imediatamente após a perfusão, os cérebros foram removidos e armazenados a 4 ° C em solução de 30% de sacarose até ao seccionamento. Os cérebros foram cortados em seções corais 25μm com micrótomo de congelamento e armazenados em solução crioprotetora a -20 ° C até o processamento imuno-histoquímico.

Uma série 1: 6 através do eixo rostrocaudal de cada cérebro foi processada para GFP. Resumidamente, as sec�es foram removidas da solu�o crioprotectora, lavadas extensivamente em solu�o salina tamponada com fosfato de pot�sio (pH 7.4) e depois feitas reagir durante 15 minutos em BN H de 1% de boro-hidreto de s�io para remover o excesso de alde�os. As secções foram então incubadas numa solução de anticorpo primário dirigida contra GFP em solução salina tamponada com fosfato de potássio (KPBS) contendo 0.1% Triton-X durante 1 hora à temperatura ambiente seguida de 48 horas a 4 ° C. As células contendo GFP foram identificadas utilizando um anticorpo policlonal de coelho anti-GFP (Cat. No. A6455, Invitrogen, Carlsbad, CA) a uma concentração de 1: 100,000. Após incubação do anticorpo primário, o tecido foi enxaguado em KPBS, incubado por 1 hora em IgG de cabra anti-coelho biotinilado (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA) a uma concentração de 1: 600 e enxaguado em KPBS, seguido por um 1- incubação de uma hora em complexo de peroxidase de avidina-biotina (ABC Elite Kit Vector PK-6100, Burlingame, CA) a uma concentração de 1: 200. Depois de enxaguar em KPBS e tamp Tris (pH 7.2), a GFP foi visualizada como um produto de reaco castanho usando 3,3? -Diaminobenzidina contendo 0.08% de perido de hidrogio em tamp Tris. O produto da reacção foi terminado após aproximadamente 20 minutos por lavagem em tampão Tris. As secções foram montadas a partir de solução salina em lâminas sub-gelatinosas, secas ao ar, desidratadas numa série de álcoois graduados, limpadas em Histoclear (National Diagnostics, Atlanta, GA) e recobertas com Krystalon (EMD Chemicals, Gibbstown, NJ).

Análise Estatística

Os dados são apresentados como média ± erro padrão da média (SEM). Uma ANOVA de RM de duas vias foi executada usando o tempo gasto com cada animal de estímulo como a variável dependente, o fator dentro dos sujeitos sendo parceiro ou estranho, e o grupo de tratamento como o fator entre sujeitos. O teste Holm-Sidak foi usado para comparações de pares post hoc quando um efeito de interação significativo foi detectado. ANOVAs de uma via foram executadas em comportamentos aloparentais e de acasalamento para ratos-do-campo Os comportamentos que não atendiam aos critérios de normalidade foram analisados ​​por meio da Análise de Variância em Classificação Unilateral de Kruskal-Wallis. O Teste Exato de Fisher foi usado para determinar as diferenças de grupo na proporção de animais que exibem comportamento aloparental. O comportamento de acasalamento da ratazana Meadow foi analisado usando um teste t e Mann-Whitney Rank Sum Test quando o teste de normalidade falhou.

Comportamento aloparental em pradaria ratazanas

A proporção de ratazanas fêmeas injetadas com CMV-OTR exibindo comportamento aloparental (3/9) não diferiu do controle (4/15) ou ratazanas falsas (3/10) (p> 0.5; Figura 1A). Dois CMV-OTR, quatro controle CMV-GFP e duas fêmeas sham, que foram categorizadas como não-aloparentais, atacaram os filhotes. A latência para aproximar filhotes (Figura 1B) e o tempo gasto lambendo / escovando também não diferiram significativamente entre os grupos (H = 0.31, P> 0.8 para latência, H = 0.40, P> 0.8 para escovando). Quando apenas os animais que atingiram o critério de ser aloparental foram comparados, a latência para abordagem dos filhotes para fêmeas CMV-OTR (140.2 ± 65.2 segundos) não foi diferente do CMV-GFP (62.5 ± 39.3 segundos) ou sham (169.4 ± 51.7 segundos) ) mulheres (F (2,7) = 1.27, p> 0.3). Também não houve diferença na quantidade de tempo que as fêmeas aloparentais CMV-OTR passaram lambendo filhotes em comparação com as fêmeas aloparentais CMV-GFP ou simuladas (F (2,7) = 1.94, p> 0.2; Figura 1C) A quantidade total de tempo que cada grupo passou lambendo / limpando, pairando e carregando os filhotes também não foi diferente entre o CMV-OTR aloparental (695.2 ± 77.1 segundos) CMV-GFP (387.5 ± 132.7 segundos) ou sham (503.8 ± 82.8 segundos) ) animais (F (2,7) = 1.98, p> 0.2).

  

Figura 1

Comportamento aloparental em fêmeas da pradaria feminina sham, CMV-GFP e CMV-OTR. A) Não houve efeito do tratamento na proporção de mulheres em cada grupo de tratamento que apresentou comportamento aloparental. As barras escuras representam a porcentagem de animais que ...

Comportamento de acasalamento em pradaria ratazanas

O comportamento de acasalamento não foi significativamente afetado pelo tratamento cirúrgico prévio das fêmeas. A latência para a primeira intromissão não foi significativamente diferente em machos pareados com fêmeas CMV-OTR em comparação com machos acasalados com CMV-GFP ou fêmeas simuladas (H = 5.043, p = 08; Figura 2A) Embora o grupo CMV-OTR tendesse a acasalar mais cedo do que os outros grupos, eles não acasalavam com mais frequência. O número de episódios de acasalamento na primeira hora não diferiu em pares contendo fêmeas CMV-OTR de pares contendo CMV-GFP ou fêmeas simuladas (F (2,31) = 0.46, p> 0.6; Figura 2B).

  

Figura 2

Acasalamento e comportamento de preferência de parceiros em fêmeas de pradaria fêmeas falsas, CMV-GFP e CMV-OTR. A latência para a primeira intromissão (A) e o número de episódios de acasalamento (B) não foram significativamente diferentes entre os grupos. C) Após um período de coabitação 6 hora, ...

Comportamento de Preferência de Parceiro em Prairie Voles

Após o período de coabitação 6 hr, nenhum dos grupos apresentou uma preferência significativa por parceiro (Figura 2C) Não houve efeito principal do tratamento (F (2,31) = 0.56, p> 0.5) ou do tempo gasto com o parceiro versus o estranho (F (1,31) = 0.46, p> 0.5). Após 12 horas adicionais de coabitação, não houve efeito principal do tratamento (F (2,29) = 78, p = 0.5) ou a quantidade de tempo gasto com o parceiro versus estranho (F (1,29) = 3.71 , p = 0.06). No entanto, houve um efeito de interação significativo (F (2,29) = 5.56, p = 0.009). O teste post-hoc revelou que as mulheres CMV-OTR passaram significativamente mais tempo em estreita proximidade com o parceiro do que com o estranho (p <0.001; Figura 2D) No entanto, o CMV-GFP e as mulheres sham não demonstraram preferência por parceiro após esse período de tempo (p> 0.05; Figura 2D). Além disso, 80% das ratazanas injectadas com CMV-OTR atingiu os critérios de preferência por um parceiro, ou seja, gastou o dobro do tempo com o parceiro do que o estranho, em comparação com apenas 31% de CMV-GFP injectado e 44% de animais falsificados (Figura 2E, F).

Expressão OTR e GFP no NAcc dos Prairie Voles

A autorradiografia foi feita para determinar a colocação da injeção de AAV e para verificar que o vetor CMV-OTR resultou no aumento da ligação de OTR em comparação com os controles. Como relatado anteriormente, houve variação individual significativa na ligação de OTR no NAcc do controle de ratos-pradaria CMV-GFP (Figura 3A, B). Elevações distintas na ligação de OTR foram detectadas no NAcc de ratazanas de pradaria injectadas com CMV-OTR (Figura 3C). Além disso, imunohistoquímica GFP foi realizada em seções do cérebro de animais CMV-GFP para determinar a extensão da expressão em neurônios do NAcc. Marcação clara de células com características neuronais foi detectada, confirmando que os vetores AAV do CMV dirigiam a expressão em neurônios (Figura 3E, F).

  

Figura 3

Análise da expressão de OTR e GFP em fêmeas de pradaria feminina CMV-OTR e CMV-GFP. A densidade de OTR foi determinada usando a autoradiografia do receptor. A, B) Houve variação significativa na densidade de ligação de OTR no NAcc de fêmeas CMV-GFP. Isto está em contraste ...

Comportamento de acasalamento em campinos

Não foram observadas diferenças significativas no comportamento de acasalamento entre os grupos de tratamento em ratos do campo. A latência para a primeira intromissão não foi diferente em machos pareados com CMV-OTR (1245.1 ± 1465.9 segundos) fêmeas em comparação com machos acasalados para controle CMV-GFP (566.6 ± 989.8 segundos) fêmeas (T = 128.0, p> 0.2). O número de acasalamentos na primeira hora também não diferiu em pares contendo fêmeas CMV-OTR (6.8 ± 5.1) de pares contendo fêmeas CMV-GFP (9.5 ± 4.4) (t = 1.42, p> 0.1).

Preferência do Parceiro em Meadow Voles

Após um período de coabitação 24hr, nenhum dos grupos apresentou uma preferência significativa por parceiro (Figura 4A) Não houve efeito principal do tratamento (F (1,20) = 0.19, p> 0.6) ou tempo gasto com o parceiro versus estranho (F (1,20) = 0.09, p> 0.7). Após 48 horas adicionais de coabitação, não houve novamente nenhum efeito principal significativo do tratamento (F (1,19) =. 65, p> 0.4) ou do tempo gasto com qualquer mulher (F (1,19) = 0.62, p> .4; Figura 4B).

  

Figura 4

Comportamento preferencial do parceiro de fêmeas de capoeira após uma coexistência de 24 h (A) e após uma co-habitação culminante de 72 horas (B). As mulheres injetadas com CMV-OTR e CMV-GFP não mostraram preferência pelo parceiro. Eles gastaram quantidades iguais de tempo com o parceiro ...

Expressão OTR no NAcc de Meadow Ves

As ratazanas injectadas com CMV-GFP tinham pouca ou nenhuma ligação à OTR na NAcc (Figura 5A). Em contraste, as ratazanas de prado injectadas com CMV-OTR tinham uma ligação significativa de OTR na NAcc, comparável à das fêmeas da pradaria (Figura 5B).

  

Figura 5

Autorradiografia do receptor ilustrando a densidade de ligação a OTR na NAcc de ratazanas do prado CMV-OTR (A) e CMV-GFP (B). Note que as ratazanas fêmeas CMV-GFP tinham pouca ou nenhuma ligação OTR no NAcc. No entanto, a ligação OTR no NAcc foi dramaticamente elevada ...

Os autores gostariam de agradecer a Lorra Mathews por seu excelente trabalho na gestão de nossa colônia de ratazanas. Este estudo foi apoiado pelo NIH concede MH064692 a LJY, RR00165 ao Centro Nacional de Pesquisa de Primatas de Yerkes e NSF STC IBN-9876754.

1. Bales KL, Carter CS Diferenças sexuais e efeitos de desenvolvimento da ocitocina na agressão e comportamento social em prados de campo (Microtus ochrogaster) Horm Behav. 2003; 44: 178 – 184. [PubMed]
2. Bales KL, Westerhuyzen van JA, Lewis-Reese AD, ND Grotte, Lanter JA, Carter CS. A ocitocina tem efeitos desenvolvimentais dependentes da dose na ligação de pares e no cuidado aloparental em fêmeas de pradaria. Horm Behav. 2007; 52: 274 – 279. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
3. Curtis JT, Wang Z. Envolvimento da área tegmentar ventral na união de pares em machos da pradaria. Physiol Behav. 2005a; 86: 338 – 346. [PubMed]
4. Curtis JT, Wang Z. Envolvimento do receptor de glicocorticóide na união de pares em fêmeas de pradaria: efeitos do bloqueio agudo e interações com sistemas centrais de recompensa de dopamina. Neurociência. 2005b; 134: 369 – 376. [PubMed]
5. Dantzer R, Bluthe RM, Koob GF, Le Moal M. Modulação da memória social em ratos machos por peptídeos neuro-hipofisários. Psicofarmacologia (Berl) 1987; 91: 363-368. [PubMed]
6. Cúpulas G, Heinrichs M, Michel A, C Berger, Herpertz SC. A ocitocina melhora a “leitura da mente” em humanos. Psiquiatria Biol. 2007; 61: 731 – 733. [PubMed]
7. Ferguson JN, JM Aldag, Insel TR, Young LJ. A ocitocina na amígdala medial é essencial para o reconhecimento social no camundongo. J Neurosci. 2001; 21: 8278 – 8285. [PubMed]
8. Gingrich B, Liu Y, C Cascio, Wang Z, Insel TR. Os receptores dopaminérgicos D2 no nucleus accumbens são importantes para o apego social em fêmeas de pradaria (Microtus ochrogaster) Behaviour Neurosci. 2000; 114: 173 – 183. [PubMed]
9. Gruderadams S, Getz LL. Comparação do Sistema de Acasalamento e Comportamento Paterno em Microtus ochrogaster e Microtus pennsylvanicus. Jornal da Mammalogia. 1985; 66: 165 – 167.
10. Guastella AJ, Mitchell PB, Dadds MR. A ocitocina aumenta o olhar para a região dos olhos dos rostos humanos. Psiquiatria Biol. 2008; 63: 3 – 5. [PubMed]
11. Hollander E, Bartz J, Chaplin W, Phillips A, Sumner J, Soorya L., Anagnostou E, Wasserman S. A ocitocina aumenta a retenção da cognição social no autismo. Psiquiatria Biol. 2007; 61: 498 – 503. [PubMed]
12. Insel TR, Shapiro LE. A distribuição dos receptores de ocitocina reflete a organização social em ratos monogâmicos e poligâmicos. Proc Natl Acad Sci EUA A. 1992; 89: 5981 – 5985. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
13. Insel TR, Gelhard R, Shapiro LE. Distribuição comparativa de receptores prosencefinos para peptídeos neuro-hipofisários em camundongos monogâmicos e poligâmicos. Neurociência. 1991; 43: 623 – 630. [PubMed]
14. Jacob S, CW Brune, CS Carter, Leventhal BL, Senhor C, Cook EH., Jr Associação do gene do receptor de ocitocina (OXTR) em crianças caucasianas e adolescentes com autismo. Neurosci Lett. 2007; 417: 6 – 9. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
15. Kavaliers M, Colwell DD, Choleris E, Agmo A, LJ Muglia, Ogawa S, Pfaff DW. Discriminação prejudicada e aversão a odores masculinos parasitados por camundongos knockout de ocitocina fêmeas. Genes Brain Behav. 2003; 2: 220 – 230. [PubMed]
16. Kendrick KM. Ocitocina, maternidade e vínculo. Exp Physiol. 2000; 85 (nº de especificação): 111S – 124S. [PubMed]
17. Kendrick KM, Keverne EB, Baldwin BA, Sharman DF. Níveis de acetilcolinesterase no líquido cefalorraquidiano, monoaminas e ocitocina durante o trabalho de parto, parto, estimulação vaginocervical, separação de cordeiros e aleitamento em ovinos. Neuroendocrinologia. 1986; 44: 149 – 156. [PubMed]
18. Kosfeld M, Heinrichs M., Zak PJ, Fischbacher U, Fehr E. A ocitocina aumenta a confiança nos seres humanos. Natureza. 2005; 435: 673 – 676. [PubMed]
19. Lerer E, Levi S, Salomon S, Darvasi A, N Yirmiya, RP de Ebstein. Associação entre o gene do receptor de ocitocina (OXTR) e autismo: relação com as escalas de comportamento adaptativo de Vineland e cognição. Psiquiatria Mol. 2007 [PubMed]
20. Lim MM, Young LJ. Circuitos neurais dependentes de vasopressina subjacentes à formação de ligações de pares na ratazana de pradaria monogâmica. Neurociência. 2004; 125: 35 – 45. [PubMed]
21. MM Lim, Wang Z, DE Olazabal, Ren X, Terwilliger EF, Jovem LJ. Maior preferência de parceiros em uma espécie promíscua, manipulando a expressão de um único gene. Natureza. 2004; 429: 754 – 757. [PubMed]
22. Lim MM, Liu Y, Ryabinina AE, Bai Y, Wang Z, Jovem LJ. Os receptores de CRF no nucleus accumbens modulam a preferência do parceiro em ratos da pradaria. Horm Behav. 2007; 51: 508 – 515. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
23. Liu Y, Wang ZX. Nucleus accumbens oxytocin e dopamine interagem para regular a formação de vínculo em pares em fêmeas de pradaria. Neurociência. 2003; 121: 537 – 544. [PubMed]
24. Lonstein JS, De Vries GJ. Diferenças entre os sexos no comportamento parental de prole virgens adultas: independência dos hormônios gonadais e da vasopressina. J Neuroendocrinol. 1999; 11: 441 – 449. [PubMed]
25. Lonstein JS, De Vries GJ. Influência dos hormônios gonadais no desenvolvimento do comportamento parental em fêmeas adultas virgens da pradaria (Microtus ochrogaster) Behav Brain Res. 2000; 114: 79 – 87. [PubMed]
26. Olazabal DE, Young LJ. A variabilidade no comportamento materno “espontâneo” está associada ao comportamento parecido com a ansiedade e à afiliação em fêmeas de jaguatirica juvenis e adultas (Microtus ochrogasterDev Psychobiol. 2005; 47: 166 – 178. [PubMed]
27. Olazabal DE, Young LJ. Diferenças de espécies e indivíduos no tratamento aloparental de fêmeas jovens estão associadas à densidade de receptores de ocitocina no estriado e no septo lateral. Horm Behav. 2006a; 49: 681 – 687. [PubMed]
28. Olazabal DE, Young LJ. Os receptores de ocitocina no nucleus accumbens facilitam o comportamento materno “espontâneo” em fêmeas adultas de pradaria. Neurociência. 2006b; 141: 559 – 568. [PubMed]
29. Paxinos G, Watson C. O cérebro do rato em coordenadas estereotáxicas. quarta edição Academic Press; San Diego, CA: 1998.
30. Pitkow LJ, Sharer CA, Ren X, Insel TR, Terwilliger EF, Jovem LJ. Facilitação da afiliação e formação de pares por transferência do gene do receptor de vasopressina no prosencéfalo ventral de uma ratazana monogâmica. J Neurosci. 2001; 21: 7392 – 7396. [PubMed]
31. Roberts RL, Zullo A, Gustafson EA, Carter CS. Os tratamentos esteróides perinatais alteram o comportamento aloparental e afiliativo em ratos da pradaria. Horm Behav. 1996; 30: 576 – 582. [PubMed]
32. Roberts RL, Williams JR, Wang AK, Carter CS. Reprodução cooperativa e monogamia em prados de pradaria: Influências do pai e variação geográfica. Anim Behav. 1998; 55: 1131 – 1140. [PubMed]
33. Sansone GR, Gerdes CA, Steinman JL, Winslow JT, Ottenweller JE, Komisaruk BR, Insel TR. Estimulação vaginocervical libera ocitocina na medula espinhal em ratos. Neuroendocrinologia. 2002; 75: 306 – 315. [PubMed]
34. Savaskan E, Ehrhardt R. Schulz A, Walter M, Schachinger H. A ocitocina intranasal de pós-aprendizagem modula a memória humana para a identidade facial. Psiconeuroendocrinologia. 2008; 33: 368 – 374. [PubMed]
35. Smeltzer MD, Curtis JT, Aragona BJ, Wang Z. Ligação de receptores de dopamina, ocitocina e vasopressina no córtex pré-frontal medial de ratos monogâmicos e promíscuos. Neurosci Lett. 2006; 394: 146 – 151. [PubMed]
36. Wang Z, Young LJ. Ontogenia da ligação do receptor de oxitocina e vasopressina no septo lateral em pradaria e montana. Brain Res Dev Brain Res. 1997; 104: 191 – 195. [PubMed]
37. Wang Z, Ferris CF, De Vries GJ. Papel da inervação septal da vasopressina no comportamento paterno em fêmeas da pradaria (Microtus ochrogaster) Proc Natl Acad Sci EUA A. 1994; 91: 400 – 404. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]
38. Williams JR, Catania KC, Carter CS. Desenvolvimento de preferências de parceiros em fêmeas de pradaria (Microtus ochrogaster): o papel da experiência social e sexual. Horm Behav. 1992; 26: 339 – 349. [PubMed]
39. Winslow JT, Hastings N, CS Carter, Harbaugh CR, Insel TR. Um papel para a vasopressina central na ligação de pares em ratos de pradaria monogâmicos. Natureza. 1993; 365: 545 – 548. [PubMed]
40. Wu S, Jia M, Y Ruan, Liu J, Y Guo, Shuang M, X Gong, Y Zhang, Yang X, Zhang D. Associação positiva do gene do receptor da ocitocina (OXTR) com autismo na população chinesa Han. Psiquiatria Biol. 2005; 58: 74 – 77. [PubMed]
41. Jovem LJ. Frank A. Beach Award. Receptores de ocitocina e vasopressina e comportamentos sociais típicos de espécies. Horm Behav. 1999; 36: 212 – 221. [PubMed]
42. Young LJ, Wang Z. A neurobiologia da ligação de pares. Nat Neurosci. 2004; 7: 1048 – 1054. [PubMed]
43. Young LJ, Lim MM, Gingrich B, Insel TR. Mecanismos celulares de apego social. Horm Behav. 2001; 40: 133 – 138. [PubMed]
44. Jovem LJ, Huot B, Nilsen R. Wang Z, Insel TR. Diferenças de espécies na expressão gênica do receptor central de oxitocina: análise comparativa de seqüências promotoras. J Neuroendocrinol. 1996; 8: 777 – 783. [PubMed]
45. Yrigollen CM, Han SS, Kochetkova A, Babitz T, Chang JT, FR Volkmar, Leckman JF, Grigorenko EL. Genes controlando o comportamento afiliativo como genes candidatos para o autismo. Psiquiatria Biol. 2008; 63: 911 – 916. [Artigo gratuito do PMC] [PubMed]