Nivelet e Shprehjes së MikroNNA Circulating Associated With Internet Gaming Disorder (2018)

Abstrakt

Sfond

Përdorimi i varur nga interneti dhe lojërat në internet është një çrregullim i mundshëm psikiatrik i quajtur "çrregullim i lojërave të internetit" (IGD). Profilet e shprehjes së ndryshuar të mikronës (miRNA) janë raportuar në indet e gjakut dhe trurit të pacientëve me çrregullime të caktuara psikiatrike dhe sugjerohen si biomarkerë. Megjithatë, nuk ka pasur raporte mbi profilet miRNA të gjakut në IGD.

Metodat

Për të zbuluar miRNA-të që lidhen me IGD, ne kemi analizuar profilet e shprehjes miRNA të mostrave të 51 (kontrollet 25 IGD dhe 26) duke përdorur Array me miRNA me Dendësi të Ulët TaqMan. Për vlefshmërinë, kemi kryer PCR me sasiore të transkriptimit të kundërt me mostra të pavarura 36 (kontrollet 20 IGD dhe 16).

Rezultatet

Nëpërmjet zbulimit dhe vlefshmërisë së pavarur, ne identifikuam tre miRNA (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p, hsa-miR-652-3p) që ishin dukshëm nënreguluar në grupin IGD. Individët me të gjitha tre ndryshimet e miRNA-së kishin një rrezik shumë më të lartë të IGD se ato me asnjë ndryshim (OR (22), 95% CI 2.29-211.11], dhe OR rritën dozën varësisht nga numri i miRNA-ve të ndryshuara. Gjenet e parashikuara të objektivit të tre miRNA-ve u shoqëruan me rrugë nervore. Ne eksploruar shprehjen e proteinave të tre gjenet e synuar në drejtim të rrymës nga Western blot dhe konfirmoi se shprehja e GABRB2 dhe DPYSL2 ishte dukshëm më i lartë në grupin IGD.

Përfundim

Ne kemi vërejtur se shprehjet e hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p dhe hsa-miR-652-3p u redreguluan në pacientët me IGD. Rezultatet tona do të jenë të dobishme për të kuptuar patofiziologjinë e IGD.

Keywords: Çrregullim i lojrave në internet, mikroRNA, biomarkues, varësi, blot perëndimore

Prezantimi

Përdorimi i varur nga Internet dhe lojëra të bazuara në internet nuk është thjesht një fenomen social në vendet me infrastrukturë të gjerë të qasjes në internet, por një çrregullim i mundshëm psikiatrik i quajtur "çrregullim i lojërave të internetit" (IGD) (-). Sipas raporteve epidemiologjike, normat e prevalencës së IGD në adoleshentë ndryshojnë në vende të ndryshme, duke filluar nga 0.8 në 26.7% (). Veçanërisht, studimet tregojnë shkallët e prevalencës mbi 10% në adoleshentët në shumë vende aziatike si Koreja e Jugut, Kina, Tajvani, Hong Kongu dhe Singapori (). IGD shoqërohet me dëmtim në njohuritë, marrëdhëniet psiko-sociale dhe jetën e përditshme; për shembull, rënia e performancës akademike ose profesionale (-). IGD tani është përfshirë në Seksionin III (Kushtet për Studim të mëtejshëm) të rishikimit të pestë të Manualit Diagnostik dhe Statistikor të Çrregullimeve Mendore (DSM-V) (). Sidoqoftë, pavarësisht nga rëndësia kliniko-sociale, pak është e njohur për mekanizmin molekular gjenetik që qëndron pas IGD.

Studimet e fundit binjake në shkallë të gjerë kanë sugjeruar një sfond gjenetik të IGD (, ). Vink et al. hetuar dallimet individuale në përdorimin e internetit në mënyrë të detyruar me binjakët monozygotic 5,247 dhe dizygotic adoleshent në Regjistrin binjak të Holandës dhe raportuan se 48% e dallimeve janë shpjeguar me faktorë gjenetikë (). Li et al. vërejtur çifte 825 të binjakëve adoleshentë kinezë dhe raportuan se faktorët gjenetikë shpjeguan 58-66% të dallimeve (). Në përputhje me rrethanat, polimorfizmat e gjeneve të përfshira në neurotransmision, njohje dhe vëmendje të tilla si gjenet D2 receptor dopamine (DRD2), catecholamine-O-methyltransferase gene (COMT), serotonin transporter gjen (5HTTLPR), dhe gjen i nikotinic alfa 4 receptorit kolinergik (CHRNA4) janë raportuar të jenë dukshëm të lidhura me varësinë e internetit (-). Kohët e fundit, Kim et al. variantet e përzgjedhur të më shumë se gjenet e kandidatëve 100 të lidhura me prodhimin, veprimin dhe metabolizmin e neurotransmetuesve sipas analizës së sekuencimit të gjeneratës së ardhshme dhe raportuan se rs2229910 e NTRK3 gjen është i lidhur me IGD ().

Përveç faktorëve gjenetikë, është gjithashtu e njohur mirë se phenotypes neuro-sjelljes janë të kontrolluara epigenetically nga RNA non-coding përfshirë microRNAs (miRNAs) (, ). miRNA-të janë molekula të vogla jo-koduese të një ARN (me afërsisht 20-23 në gjatësi), që rregullojnë negativisht shprehjen e proteinave koduese të gjeneve duke degraduar mRNA dhe luajnë një rol kritik në procesin patofiziologjik të sëmundjeve të ndryshme (). Linjat e provave kanë treguar se miRNA-të janë të bollshme në sistemin nervor qendror të njeriut (CNS) dhe veprojnë për të rregulluar mirë nivelet e shprehjes së gjeneve të tyre të synuar, të cilët janë të përfshirë në zhvillimin dhe maturimin e sistemit CNS (). Në të vërtetë, studimet e fundit kanë zbuluar se profilet e shprehjes miRNA janë ndryshuar në indet e trurit të pacientëve me çrregullime psikiatrike, duke sugjeruar që profilet e tyre të shprehjes mund të jenë biomarkerë për çrregullime psikiatrike (, , ). Për shembull, përmes analizës postmortem, Lopez et al. raportoi se shprehja e miR-1202, e cila rregullon shprehjen e gjenit të receptorit glutamat metabotropik-4 dhe parashikon përgjigjen ndaj antidepresantit, u redregulua në indet e korteksit prefrontal të pacientëve me çrregullim të madh të depresionit (). Në aspektin e shqyrtimit të biomarkerit, kjo qasje ka një kufizim të qartë sepse kryerja e një biopsi të indeve të CNS për shfaqjen është e pamundur. Meqenëse miRNA-të mund të zbulohen në gjak (plazma ose serum), miRNA-të qarkulluese kanë një avantazh të caktuar si biomarkues jo-invazivë në çrregullimet neuropsikiatrike. Megjithatë, deri më sot, nuk ka pasur studime për qarkullimin e profileve miRNA në IGD. Një kuptim më i mirë i profileve të qarkullimit të miRNA mund të ndihmojë në sqarimin e mekanizmit të zhvillimit të IGD dhe të lehtësojë përkthimin klinik.

Në këtë studim, synonim të identifikonim markerët miRNA të lidhura me IGD duke vëzhguar miRNA plazma të diferencuara të shprehura midis IGD dhe grupeve të kontrollit dhe të hulumtoheshin implikimet e tyre biologjike.

Materialet dhe Metodat

Subjektet e studimit

Ne anketuam adoleshentët 3,166 (vitet e moshës 12-18) duke përdorur rezultatin DSM-V IGD. Midis tyre, 251 (168 meshkuj dhe femra 83) u diagnostikuan si IGD sipas kritereve DSM-V (). Një total i individëve 91 (kontrollet 49 IGD dhe 42) ofruan pëlqimin e informuar për këtë studim. Midis tyre, katër individë u përjashtuan sipas kritereve të përjashtimit. Së fundi, individët 87 (subjektet 45 IGD dhe individët e kontrollit të shëndoshë 42) u regjistruan për këtë studim. Midis tyre, pjesëmarrësit e 51 (pacientët 25 IGD dhe kontrollet 26) u rekrutuan si zbulim i vendosur nga 2014 në 2016. Pjesëmarrësit e tjerë të 36 (pacientët 20 IGD dhe kontrollet 16) u rekrutuan si vlefshmëri e pavarur e vendosur nga 2016. Të gjithë pjesëmarrësit ishin individë koreanë, të regjistruar nga Spitali i Seulit të Shën Marisë (Seul, Korenë e Jugut) dhe Spitali Kombëtar i Universitetit të Seoulit Boramae (Seul, Korenë e Jugut). Të gjithë pjesëmarrësit iu nënshtruan një interviste të strukturuar nga një psikiatër i bazuar në Programin Korean Kiddie për Çrregullimet Afektive dhe Skizofreninë (K-SADS-PL) (). Të gjithë pjesëmarrësit përfunduan bërthamën e Dizajnit të Bllokut dhe të fjalorit të shkrimit Korean-Wechsler Intelligence Scale for Children, botimi 4th (K-WISC-IV) (). Impulsiviteti u vlerësua nga Barratt Impulsiveness Scale (BIS) (). Sistemi i ndalimit të sjelljes (BINS) dhe shkalla e Sistemit të Aktivizimit të Sjelljes (BAS) u matën për të vlerësuar dimensionin e personalitetit (). Kriteret e përjashtimit përfshinin çrregullime të mëhershme mjekësore (p.sh., diabet mellitus), çrregullime neurologjike (p.sh., çrregullime të kapjes, lëndime të kokës), çrregullime psikiatrike (p.sh., çrregullime të mëdha depresive, çrregullime ankthi), vonesë mendore ose abuzime me substanca (p.sh. , duhan, kanabis, alkool). Karakteristikat e përgjithshme të lëndëve studimore janë përmbledhur në Tabelën Table1.1. Ky studim u miratua nga Bordi i Shqyrtimit Institucional të Kolegjit Mjekësor të Koresë së Universitetit Katolik (MC16SISI0120). Të gjithë pjesëmarrësit dhe prindërit e tyre dhanë pëlqimin me shkrim të informuar.

Tabela 1

Karakteristikat e përgjithshme të lëndëve studimore.

 ZbulimSanksionimKombinuar
 
 KontrolliGND-jaP-VleraKontrolliGND-jaP-VleraKontrolliGND-jaP-Vlera
N2625 1620 4245 
Mosha (vjet)
Median (min-max)13 (12 - 17)13 (12 - 15)0.75915 (13 - 18)14.5 (12 - 18)0.62814 (12 - 18)14 (12 - 18)0.509
Orët javore të lojrave në internet (h)
Median (min-max)5.25 (2 - 17)18 (6 - 46)1.27E-6a5.5 (2 - 23)8 (1 - 112)0.3745.5 (2 - 23)14 (1 - 112)1.63E-5a
Të ardhurat mujore të familjes (milion KRW)
Median (min-max)5 (1 - 9)3 (1 - 9)0.5884 (4 - 4)2 (2 - 2)1.0005 (1 - 9)3 (1 - 9)0.460
Edukimi (vite)
Median (min-max)8 (7 - 9)8 (7 - 9)0.58412 (12 - 12)6 (6 - 13)0.3058 (7 - 12)8 (6 - 13)0.269
K-WISC: dizajn bllok
Median (min-max)10.5 (4 - 17)10 (4 - 16)0.54410 (3 - 16)12.5 (4 - 15)0.12510 (3 - 17)11 (4 - 16)0.598
K-WISC: fjalor
Median (min-max)9 (5 - 17)7 (5 - 13)0.1749.5 (8 - 15)11.5 (5 - 15)0.5959 (5 - 17)9 (5 - 15)0.527
KS
Median (min-max)24 (17 - 36)37 (22 - 51)3.81E-6a29 (17 - 34)59 (22 - 108)1.2E-5a25 (17 - 36)40 (22 - 108)2.05E-10a
BIS
Median (min-max)63 (35 - 75)67.5 (45 - 81)0.08061 (45 - 79)63 (32 - 82)0.83562 (35 - 79)65 (32 - 82)0.240
BAS
Median (min-max)31 (15 - 40)31 (13 - 51)0.55836.5 (22 - 48)34 (27 - 52)1.00032 (15 - 48)34 (13 - 52)0.637
kazanët
Median (min-max)18 (10 - 26)17.5 (13 - 27)0.64218.5 (12 - 25)20 (13 - 21)0.13818 (10 - 26)19 (13 - 27)0.302
 

IGD, pacientët e telasheve të lojrave; KS, shkalla koreane e varësisë në Internet; BIS, Barratt Impulsivity Scale; BAS, Sistemi i Aktivizimit të Sjelljes; BINS, Sistemi i Ndalimit të Sjelljes; KRW, koreane fituar.

aP <0.05 (Testi Mann – Whitney – Wilcoxon).

Eksperimentet me TaqMan me Dendësi të Ulët të miRNA (TLDA)

Gjaku periferik u mblodh nga secili pjesëmarrës dhe u transferua në laborator brenda 4 h për të minimizuar lizën e qelizave të gjakut. Mostra u centrifugua në 3,000 rpm për 10 min në temperaturën e dhomës. Pastaj, supernatanti (shtresa e plazmës) u mblodh pa kontaminuar qelizat e gjakut. MiRNA-të qarkulluese u nxorën duke përdorur TaqMan miRNA ABC Pastrimi Kit (Human Panel A, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, SHBA) sipas udhëzimeve të prodhuesit. Shkurtimisht, 50 μL e mostrës së plazmës dhe 100 μL të bustit ABC ishin të përziera. Pas hibridizimit me rruaza magnetike anti-miRNA specifike të synuar, miRNA të qarkulluara kufizuese u elituan nga rruaza me 100 μL të tamponit të elucionit. Në fazën e zbulimit, 381 miRNAs u ekzaminuan nga mostrat e plazmës 51 (25 IGDs dhe kontrollet 26) duke përdorur paketën TaqMan miRNA ABC Purification Kit (Human Panel A, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) sipas udhëzimeve të prodhuesit. Transkriptimi i kundërt i Megaplex dhe reagimet para amplifikimit u kryen për të rritur sasinë e cDNA për analizën e shprehjes miRNA duke përdorur MegaplexPreAmp Primers Pool Njeriut A dhe TaqManPreAmp Master Mix (Thermo Fisher Scientific). Paneli i TLDA Një v2.0 (Thermo Fisher Scientific) është drejtuar në sistemin real-time PCR ViiA7 (Thermo Fisher Scientific) për të vlerësuar shprehjen e miRNAs. Të dhënat e papërpunuara u përpunuan duke përdorur ExpressionSuite Software v1.0.4 (Thermo Fisher Scientific) për të përcaktuar vlerat Ct për çdo miRNA.

Analiza e te dhenave per TLDA

Ne së pari matëm ciklet e pragut (vlera Ct) e secilës miRNA. miRNA me një vlerë Ct> 35 u konsideruan si të pazbulueshme dhe të përjashtuara nga analiza e mëvonshme. Të gjitha vlerat e CT-së u normalizuan në vlerën e CT të miR-374b (vlera ΔCt), një nga miRNA-të më të shprehura në mënyrë stabile që qarkullon në plazmën njerëzore (). Një raport log-2 i ndryshimit të deleve (vlera ΔΔCt) e shprehjes është llogaritur duke përdorur vlerat mesatare të mostrave të kontrollit si një kalibrator në paketën HTqPCR në Bioconductor (). Vleresimi relative (RQ) i cdo target miRNA u percaktua si 2-ΔΔCt. Për testimin hipotetik të ndryshimit në shprehjen mes dy grupeve, ne kemi aplikuar analiza variabël surrogate (SVA) për të kapur heterogjenitete të tilla si efektet grumbull në eksperimentet duke përdorur SVA paketë në Bioconductor (). miRNAs me një P-vlera <0.05 janë konsideruar të jenë dukshëm të ndryshme midis dy grupeve.

Analiza e pasurimit të grupit të gjeneve

Për analizën e pasurimit të gjeneve, kemi përdorur ToppFun në Suite ToppGene () për të konkluduar në mënyrë të konsiderueshme të pasuruar Gene Ontology (GO) () Termat, shtegu dhe kushtet e sëmundjes. Si input për këtë qasje, ne përdorëm 1,230 parashikuar gjene të synuar të miRNAs kandidat. Analiza e rrugës është përdorur për të gjetur rrugë të rëndësishme të gjeneve të synuar të parashikuar sipas KEGG, BioCarta, Reactome, GeneMAPP dhe MSigDBin në rrugët ToppGene. Rëndësia e kushteve funksionale të pasurimit u përcaktua bazuar në rregullimet e Bonferroni P-Vlera.

Transmetimi sasior i kundërt PCR (qRT-PCR) Validimi dhe përsëritja

Për të vërtetuar miRNA-të e 10 që u shprehën në mënyrë të diferencuar në fazën e zbulimit, qRT-PCR u krye duke përdorur TaqMan MicroRNA Assay (miR-15b-5p, #000390, miR-26b-5p, #000407, miR-29b-3p, 000413; miR-125b-5p, #000449; miR-200c-3p; #002300; miR-337-5p; #002156; miR-411-5p; #001610; miR-423-5p; #002340; miR-483 -5p, #002338; dhe miR-652-3p, #002352) dhe sistemi ViiA7 (Life Technologies) sipas protokollit të prodhuesit. Dhjetë nanogramë ARN totale u konvertuan në cDNA të para-fillesë me primer të miRNA-specifike duke përdorur TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit (#4366596, Life Technologies), pasuar nga PCR në kohë reale me TaqMan Probes. RQ e çdo miRNA u përcaktua si 2-ΔCt, ku ΔCt është dallimi në ciklet e pragut për mostrën në fjalë, normalizuar kundër miRNA endogjene (miR-374b-5p, #001319). Të gjitha reaksionet e PCR u kryen në tri kopje, dhe vlerat e tyre Ct u përlloganuan. Kemi llogaritur një raport log-SHNUMX të ndryshimit të deleve (ΔΔCt) të secilës miRNA në të njëjtën mënyrë si në analizën e bazuar në array. Një test jo-parametrik Mann-Whitney-Wilcoxon është kryer për të testuar dallimet në nivelet e shprehjes së miRNA-ve në dy grupe me një prag Pvlera e 0.05.

Analiza Western Blot

Çdo mostër serume u depletua fillimisht nga proteinat më të larta të 14 (albumin, imunoglobulin G, imunoglobulin A, serotransferin, haptoglobinë, antitripsina alfa-1, fibrinogjen, alfa-2 makroglobulin, alfa-1 acid glycoprotein, imunoglobulin M, apolipoprotein AI , apolipoprotein A-II, komplement C3 dhe transthyretin) duke përdorur kolonën MARS-14 (4.6 × 50 mm, Agilent Technology, Santa Clara, CA, SHBA) para analizës perëndimore blot. Pjesa e pa lidhur e marrë nga kolona MARS-14 u përqendrua duke përdorur një filtër centrifugal të Amicon Ultracel-3 (ndërprerja 3 kDa), dhe pastaj përqendrimi i proteinës u përcaktua duke përdorur metodën e acidit bikinkonik. Sasitë e njëjta (nga 10 në 30 μg) të mostrave të kontrollit dhe serumit të IGD u ndanë në një 4-20% Mini-PROTEAN TGX xham precast (Bio-Rad, CA, USA) dhe u transferuan në një membranë difluoride të polivinilidit. Tjetra, membrana u bllokua në TBS-T (190 mM NaCl, 25 mM Tris-HCl, pH 7.5 dhe 0.05% Tween 20) me 5% qumësht të thatë jo yndyror në temperaturën e dhomës për 30 min. Membranat pastaj u inkubuan me antitrupa primare ndaj DPYSL2 (1: 500, Novus Biologicals, Littleton, CO, SHBA), GABRB2 (1: 1000, Abcam, Cambridge, MA, SHBA), dhe CNR1 (1: 100, Santa Cruz Biotechnology , Inc., Santa Cruz, CA, SHBA), DUSP4 (1: 500, MybioSource, San Diego, CA, SHBA), dhe PI15 (1: 500, MybioSource, San Diego, CA, % qumësht të thatë jo-yndyrë në 5 ° C brenda natës, dhe pastaj me antitrupa të përshtatshme sekondë ose anti-mouse të gjedhit (4: 1, Santa Cruz Biotechnology) ose anti-lepuri dhie (1,000: 1, Cell Signaling, Beverly, ) e lidhur me peroksidazën e rrikë në temperaturën e dhomës për 1,000 h. Zbulimi i sinjalit është kryer duke përdorur chemiluminescence me reagent ECL (GE healthcare, Piscataway, NJ, USA). Ne përcaktojmë rezultatet e bloteve perëndimore duke përdorur programin e analizës TotalLab 1D (Jo-lineare Dinamika, Newcastle upon Tyne, Britani e Madhe). Pastaj, vlera e raportit të densitometrisë është llogaritur duke ndarë vlerën densitometrike të secilit mostër siç përshkruhet diku tjetër (). Si një kontroll për normalizimin, një kampion serumi i grumbulluar nga 46 IGD dhe mostrat e kontrollit është përdorur për çdo eksperiment. Rëndësia statistikore u përcaktua duke përdorur një test jo-parametrik Mann-Whitney-Wilcoxon me një prag Pvlera e 0.05.

Rezultatet

Karakteristikat e Subjekteve të Studimit

Tiparet demografike dhe klinike të subjekteve të studimit janë paraqitur në Tabelën Table1.1. Kur krahasuam IGD dhe grupet e kontrollit sipas Shkallës Koreane të Ndryshimit të Varësisë nga Interneti (K-Scale) siç përshkruhet diku tjetër (, ), grupi IGD tregoi një vlerë mesatare më të lartë K-Scale se grupi i kontrollit (37 vs 24, P = 3.81 10-6) (Tabela (Table1) .1). Koha mesatare javore e shpenzuar në lojërat në internet në grupin IGD ishte dukshëm më e gjatë se ajo e kontrolleve (18 vs 5.25 h, P = 1.27 10-6). Ndërsa nuk kishte dallim të dukshëm midis dy grupeve në moshë, të ardhurave mujore të familjes, kohëzgjatjes së arsimit, dizajnit të bllokut dhe rezultateve subtest të fjalorit të K-WISC, BIS, BINS dhe BAS.

MiRNAs në mënyrë të diferencuar ndërmjet IGD dhe Kontrollit

Për të zbuluar miRNA-të që lidhen me IGD, ne kemi adoptuar një qasje me dy hapa (zbulim dhe vlefshmëri të pavarur). Dizajni i studimit dhe strategjia e përgjithshme ilustrohen në Figurën S1 në Materialin Shtesë. Në fazën e zbulimit, ne analizuam profilet e shprehjes miRNA të mostrave 51 (25 IGDs dhe kontrollet 26) duke përdorur grupin miRNA që përmban miRNA 384. Nivelet e shprehjes së miRNA-ve 10 u gjetën të jenë dukshëm të ndryshme midis IGD dhe grupeve të kontrollit (Tabela (Table2) .2). Nivelet relative të shprehjes së këtyre miRNA-ve 10 janë treguar në Figura Figure1.1. Në mesin e tyre, dy (hsa-miR-423-5p dhe hsa-miR-483-5p) u rregulluan dhe tetë (hsa-miR-15b-5p, hsa-miR-26b-5p, hsa-miR-29c-3p, hsa-miR-125c-5p, hsa-miR-200-3p dhe hsa-miR-337-5p) u redreguluan në grupin IGD.

Tabela 2

MicroRNAs shprehur në mënyrë të diferencuar (miRNAs) dhe ndryshimet e deleve.

MirnaZbulimSanksionimKombinuar
 
 P-VleraNdryshoni palosjenP-VleraNdryshoni palosjenP-VleraNdryshoni palosjen
hsa-Mir-15b-5p0.0330.8290.6941.1190.3810.947
hsa-Mir-26b-5pa0.0080.8710.0490.8410.0130.857
hsa-Mir-29b-3p0.0050.4000.5601.1870.0890.647
hsa-Mir-125b-5p0.0210.5820.2900.9500.0690.723
hsa-Mir-200c-3pa0.0110.3360.0030.5422.93 × 10-50.415
hsa-Mir-337c-5p0.0090.3850.5820.8720.0200.553
hsa-Mir-411-5p0.0040.3220.3361.2820.1580.595
hsa-Mir-423-5p0.0261.3870.1890.9550.5181.175
hsa-Mir-483-5p0.0181.8610.7651.4130.2111.647
hsa-Mir-652-3pa0.0190.7150.0490.8770.0110.782
 

amiRNAs ndryshuar në mënyrë të konsiderueshme në të dy zbulimin dhe valixhen vendos në një mënyrë të qëndrueshme.

 

Një skedar i jashtëm që mban një foto, ilustrim, etj. Emri i objektit është fpsyt-09-00081-g001.jpg

Nivelet e shprehjes relative të 10 miRNAs të shprehura në mënyrë të diferencuar. Përcaktimi relativ (RQ) u normalizua në miR-374b-5p.

QRT-PCR Validimi i miRNA-ve të kandidatëve

Për të vërtetuar miRNA-të e kandidatëve 10, ne kemi kryer qRT-PCR me një grup validimi të pavarur (20 IGD dhe kontrollet 16) (Tabela S1 në Materialin Suplementar). Tre nga këto miRNAs (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p dhe hsa-miR-652-3p) janë reduktuar dukshëm në grupin IGD të grupit të validimit (Tabela (Table2) .2). Tre miRNA të tjerë (hsa-miR-337c-5p, hsa-miR-125b dhe hsa-miR-423-5p) u nënreguan gjithashtu në grupin IGD, por jo në mënyrë të konsiderueshme. Mbeturja katër miRNAs (hsa-miR-15b-5p, hsa-miR-29b-3p, hsa-miR-411-5p dhe hsa-miR-423-5p) u shprehën kundërshtuan në setin e validimit. Kur kombinuam grupet e zbulimit dhe validimit (një total i subjekteve 45 IGD dhe kontrollet 42), tre miRNA-të e validuara ishin vazhdimisht të rëndësishme (Tabela (Table2) .2). Informacion i detajuar, lokacionet kromozomale, sekuencat e pjekura dhe nivelet e shprehjes në CNS të këtyre tre miRNA-ve janë në dispozicion në Tabelën S2 në Materialin Shtesë.

Efekti sinergjik i ndryshimit të njëkohshëm të Tre miRNA në rrezik IGD

Për të vlerësuar efektin e kombinuar të tre miRNA-ve, vumë re koeficientët (OR) të katër nëngrupeve (me ndryshimet e miNNA 0, 1, 2 ose 3). Ndryshimi i miRNA ishte përcaktuar nga vlera e RQ siç përshkruhet në Seksionin "Materialet dhe Metodat. "Meqë të tre shenjat e miRNA-s u redreguluan në grupin IGD, një miRNA, vlera e të cilit RQ ishte nën një, u sfidua si një tjetër. Informata të hollësishme për secilën vlerë RQ të subjektit të studimit për tre miRNA është në dispozicion në Tabelën S3 në Materiale Shtesë. Për secilin nëngrup, shanset janë llogaritur si raport i numrit të kontrolleve me atë të IGDs, atëherë çdo OR u llogarit duke ndarë shanset e secilës nëngrup nga shanset e nëngrupit pa ndonjë ndryshim të miRNA. Individët me tre ndryshime miRNA treguan një rrezik 22 herë më të lartë se ato pa ndonjë ndryshim miRNA (OR 22, 95% CI 2.29-211.11). OR treguan një prirje në rritje me numrin e miRNA-ve të ndryshuara nga 0 në 3 (r2 = 0.996) (Figura (Figure22).

Një skedar i jashtëm që mban një foto, ilustrim, etj. Emri i objektit është fpsyt-09-00081-g002.jpg
Raportet e mosmarrëveshjeve (ORs) sipas numrit të shënuesve të reduktuar të mikroRNA (miRNA). Vlerat mbi vlerësimet e pikës janë OR (intervali i besueshmërisë 95%).

GO dhe Analiza e rrugës së gjeneve të synuara të miRNA-ve të kandidatëve

Për të fituar njohuri në funksionet e tre shënuesve miRNA të reduktuar në mënyrë të konsiderueshme në grupin IGD, gjenet e tyre të synuara u parashikuan duke përdorur bazën miRWalk 2.0 (). Gjithsej gjene 1,230 u parashikuan vazhdimisht si objektiva në drejtim të rrymës nga katër algoritme (miRWalk, miRanda, RNA22 dhe Targetscan) duke përdorur bazën miRWalk (-) (Tabela S4 në material plotësues). Analiza e pasurimit të gjeneve duke përdorur ToppFun në ToppGene Suite tregoi se gjenet e synuara të këtyre miRNAs ishin të lidhura dukshëm me rrugët e zhvillimit nervor të tilla si "udhëzimi Axon" dhe termat GO si "neurogenesis" (Tabela S5 në Materialin Suplementar).

Shprehja e gjeneve të synuara të synuara

Midis gjeneve të synuara të tre miRNA-ve, 140 u parashikua njëkohësisht për dy ose më shumë miRNA (Tabela S4 në Materialin Suplementar). Për të hulumtuar nëse nivelet e shprehjes së proteinave të gjeneve të synuara në drejtim të rrymës janë të ndryshme midis IGD dhe grupeve të kontrollit, kemi zgjedhur gjenet 2 (DUSP4 PI15), të cilat parashihen si objektiva në drejtim të rrymës të të gjitha miNNA-ve 3 dhe gjeneve shtesë 3 (GABRB2, DPYSL2dhe CNR1) nga ato të parashikuara për miNNA-të 2 dhe analizat e kryera Western blot me mostrat e plazmës nga 28 IGDs dhe kontrollet 28 të disponueshme për eksperiment. Ne krahasuam shprehjet e pesë objektivave midis IGD dhe grupeve të kontrollit duke matur intensitetin e brezit dhe zonën siç përshkruhet diku tjetër (). Midis tyre, nivelet e shfaqjes së DPYSL2 (28 IGDs dhe kontrollet 28, P = 0.0037) dhe GABBR2 (27 IGD dhe 28 kontrolle, P = 0.0052) ishin dukshëm më të larta në grupin IGD (Figura (Figure3) .3). Megjithatë, nuk mund të vëzhgonim shprehje të ndryshme të CNR1 (P = 0.0853), DUSP4 (P = 0.5443), dhe PI15 (P = 0.6346).

 

Një skedar i jashtëm që mban një foto, ilustrim, etj. Emri i objektit është fpsyt-09-00081-g003.jpg

Imazhet Western blot dhe box-dot-komplote që tregojnë shprehjen e (A) DPYSL2 dhe (B) GABRB2. Të dy proteinat DPYSL2 dhe GABRB2 shfaqën dallime të konsiderueshme në nivelet e tyre të shprehjes midis çrregullimit të lojrave në Internet (IGD) dhe mostrave të kontrollit (P-vlera <0.05). Të dy proteinat u shprehën në nivele më të larta në mostrat e IGD.

Diskutim

Është raportuar se miRNA-të janë të përfshira në zhvillimin neuronal (, ), dhe shprehja diferenciale e miRNA-ve të trurit janë vërejtur në sëmundjet psikiatrike si skizofrenia (). Prandaj, është e besueshme se qarkullimi i profileve të miRNA mund të jetë biomarkues i dobishëm për IGD. MiRNA-të qarkulluese janë sugjeruar si biomarkerë për çrregullime të ndryshme neuropsikiatrike (-); megjithatë, mekanizmat molekularë pas zhvillimit të IGD-së janë akoma shumë të panjohura pavarësisht rëndësisë klinike dhe sociale të saj. Në mënyrë të veçantë, nuk ka pasur studime mbi miRNA-të e lidhura me IGD. Qëllimi i këtij studimi ishte i dyfishtë. Së pari, ne u përpoqëm të zbulonim miRNA plazma të lidhur me IGD. Së dyti, ne vlerësuam implikimin biologjik të kandidatëve të miRNA duke eksploruar shprehjen e proteinave dhe GO të gjeneve të synuara në drejtim të rrymës. Nëpërmjet shqyrtimit të gjerë të profileve të shprehjes miRNA dhe validimit në drejtim të rrymës së kandidatëve, kemi zbuluar se shprehja e tre miRNA (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p dhe hsa-miR-652-3p) në mënyrë të konsiderueshme më të ulët në pacientët IGD se kontrollet. Megjithëse modelet shprehëse të shtatë kandidatëve të miRNA-ve të tjera nuk u përsëritën në validim, mund të jetë false negative për shkak të madhësisë së vogël të mostrës në këtë studim. Sipas njohurive tona, ky është raporti i parë mbi mundësinë që profilet e shprehjes në miRNA të gjakut mund të jenë biomarkues të dobishëm për IGD. Kombinimi i tre shënuesve miRNA mund të shërbejë si një mjet minimalisht invaziv për identifikimin e hershëm të njerëzve në rrezik të IGD.

MiRNA-të e identifikuara në këtë studim janë raportuar të përfshihen në çrregullime të ndryshme neuropsikiatrike. Shprehja e hsa-miR-200c në gjak është raportuar të jetë nënreguluar në disa çrregullime psikiatrike të tilla si skizofrenia () dhe episode të mëdha depresive (). miR-200c është raportuar të jetë më shumë i shprehur në fraksione sinaptike sesa në totalin e forebrain () dhe gjithashtu të shoqërohet me vdekjen e qelizave neurone (). Bazuar në këto raporte të mëparshme, miR-200c është i përfshirë në neurodevelopment dhe mund të shoqërohet me çrregullime neuropsikiatrike nëse shprehja e saj është e shqetësuar. Disa studime kanë sugjeruar lidhjen ndërmjet miR-652 dhe rrezikut të çrregullimeve neuropsikiatrike. Ngjashëm me qasjen tonë, për të identifikuar biomarkuesit e gjakut për skizofreninë, Lai et al. kryen analiza TLDA me pacientë skizofrenie dhe kontrolle normale dhe gjeti se shtatë miRNA duke përfshirë hSA-miR-652 u shprehën në mënyrë të diferencuar në pacientët skizofrenikë (). Në studimin e mëvonshëm, ata krijuan një model parashikimi duke përdorur të dhënat e shprehjes miRNA dhe skizofreninë e shquar me sukses nga kontrolli normal (). Shprehja e ndryshuar e hsa-miR-652 është vërejtur edhe në alkoolistët (). Hsa-miR-26b u gjet që të aktivizohej gjatë diferencimit të qelizave neuronale (). Perkins et al. raportoi se hsa-miR-26b u redregulua në korteksin paraballor të pacientëve skizofrenikë ().

Megjithëse nuk ka prova të drejtpërdrejta për të mbështetur marrëdhënien ndërmjet shprehjes së shqetësuar të këtyre miRNA dhe patofiziologjisë së IGD, mund të konkludojmë se disregulimi i këtyre miRNA mund të shoqërohet me patofiziologji të IGD bazuar në raporte të ndryshme të mëparshme në gjenet e poshtëm që kemi parashikuar . Disa nga gjenet e rrjedhës së tre miRNAs si GABRB2, CNR1, NRXN1dhe DPYSL2 raportohet të jenë të lidhura me çrregullime neuropsikiatrike. Acid Gamma-aminobutyric (GABA) është një neurotransmetues i madh frenues në CNS. Dysregulimi i receptorit GABA, është implikuar në çrregullime neuropsikiatrike duke përfshirë varësinë, ankthin dhe depresionin (), të cilat janë gjithashtu tiparet kryesore të IGD (). Polimorfizmat gjenetike në gjenet e receptorit GABA raportohen të jenë të lidhura me varësinë e alkoolit dhe skizofreninë (, ). Dihidropirimidina-like 2 (DPYSL2) është një anëtar i familjes së proteinave të ndërmjetësimit të reagimit kollapsin, i cili luan një rol në asamblenë e mikrotubulave, sinapsi sinjalizuese dhe rregullimin e rritjes axonal. Si pasojë, kjo molekulë është sugjeruar si një biomarkues për çrregullime psikiatrike (, ). Polimorfizmi në DPYSL2 gjen gjithashtu u raportua të shoqërohej me çrregullimin e përdorimit të alkoolit (). Raportet e mëparshme dhe të dhënat tona sugjerojnë që tejpërcaktimi i GABRB2 dhe DPYSL2, objektivat e poshtëm të miRNA-ve të reduktuara, ka implikime për patogjenezën e çrregullimeve neuropsikiatrike duke përfshirë IGD. Tipi i receptorit të kanabinoidit 1 (CNR1) është një heteroreceptor presinaptik që modulon çlirimin e neurotransmetuesit dhe shqetësimet në sinjalizimin kanabinoid lidhen me çrregullime të ndryshme neuropsikiatrike (). Polimorfizmi gjenetik i CNR1 geni dihet të jetë i lidhur me varësinë e substancës në kaukazianë (). Në një model miu, aktivizimi i hippocampus ventral CNR1 prish sjelljen normale sociale dhe njohjen (). Ndryshimet gjenetike në familjen NRXN dihet të përfshihen në çrregullime të ndryshme neuropsikiatrike duke përfshirë varësinë ().

Për të shqyrtuar implikimin biologjik të tre kandidatëve të miRNA në një mënyrë më të drejtpërdrejtë, ne eksploruan shprehjen e proteinave të gjeneve të tyre të synuar në drejtim të rrymës. Për shkak të disponueshmërisë së kufizuar të mostrave të plazmës, të kandidatëve të zakonshëm 140 (të parashikuar si në rrjedhën e poshtme të 2 ose më shumë miRNA), ne ekzaminuam objektivat 5 (GABRB2, DPYSL2, CNR1, DUSP4 dhe PI15) nga blotin perëndimor dhe konfirmuam se shprehja e GABRB2 dhe DPYSL2 ishte dukshëm më i lartë në grupin IGD. Raportet e mëparshme dhe të dhënat tona sugjerojnë se mbieksprimi i GABRB2 dhe DPYSL2, objektivat e poshtëm të miRNA-ve të reduktuara, mund të kenë implikime për patogjenezën e çrregullimeve neuropsikiatrike duke përfshirë IGD. Rezultatet e GO dhe analizës së shtegut të rrugëve të zhvillimit nervor gjithashtu mbështesin implikimin neurobiologjik të shënuesve miRNA. Një tjetër gjetje interesante ishte efekti synergistic i ndryshimit të njëkohshëm të miRNAs. Individët me downregulation të të gjitha miNNs 3 treguan 22 herë rrezik më të lartë se ato me asnjë downregulation, dhe OR rritet në një mënyrë të varur nga dozë. Edhe pse CI për këto tre ndryshime ishin të gjera për shkak të madhësisë së kufizuar të mostrës, korrelacioni i qartë pozitiv (r2 = 0.996) mbështet efektin sinergjik të tre miRNA-ve.

Megjithëse ne zbuluam IGD-të lidhur me shënuesit miRNA dhe individët me të gjitha tre ndryshimet miRNA kishin një rrezik 22 herë më të lartë se ato pa ndonjë ndryshim miRNA, ka disa kufizime në këtë studim. Së pari, madhësia e vogël e mostrës rriti gjasat e mungesës së shënuesve të tjerë të rëndësishëm miRNA. Së dyti, meqenëse të dhënat tona nuk ishin të mjaftueshme për të sqaruar nëse profilet e plazmës miRNA janë shkak ose efekt, ne nuk mund të konfirmojmë rolet biologjike të këtyre shënuesve joinvazivë në një mjedis klinik. Profilizimi i mëtejshëm i miRNA-së dhe analiza e gjeneve të tyre në rrjedhën e sipërme duke përdorur indet e njeriut të trurit nga banka e indit të trurit mund të japin një përgjigje më të drejtpërdrejtë. Analiza e indeve të trurit me një model shtazarak të çrregullimeve të lojrave gjithashtu do të ishte i dobishëm. Së treti, për shkak të disponueshmërisë së kufizuar të mostrave të plazmës, ne kemi ekzaminuar vetëm pesë molekula kandidate në drejtim të rrymës. Eksplorimi i më shumë objektivave në drejtim të rrymës me një grup më të madh të mostrës do të jetë i dobishëm për të kuptuar më tej mekanizmin molekular të IGD.

Në përmbledhje, përmes shqyrtimit të gjerë të profileve të shprehjes miRNA dhe vlefshmërisë së pavarur, ne kemi zbuluar tre miRNA të lidhur me IGD (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p dhe hsa-miR-652-3p). Shumë prej gjeneve të tyre në rrjedhën e sipërme raportohen të përfshihen në çrregullime të ndryshme neuropsikiatrike, dhe validimi eksperimental i shprehjes së ndryshuar të këtyre gjeneve në drejtim të rrymës mbështet implikimin e miRNA-ve të identifikuara në këtë studim. Ne kemi gjetur se individët me downregulation të të tre miRNA janë në rrezik të lartë të IGD. Së bashku me faktorët e njohur klinik ose mjedisor të rrezikut dhe kriteret diagnostikuese, gjetjet tona mund të lehtësojnë ndërhyrjen e hershme për të ndihmuar njerëzit në rrezik më të lartë të IGD.

Deklarata e Etikës

Ky studim u miratua nga Bordi i Shqyrtimit Institucional të Kolegjit Mjekësor të Koresë së Universitetit Katolik (MC16SISI0120). Të gjithë pjesëmarrësit dhe prindërit e tyre dhanë pëlqimin me shkrim të informuar.

Kontributet e autorëve

ML dhe HC kontribuan në mënyrë të barabartë në këtë letër. ML, D-JK dhe Y-JC e kanë projektuar studimin. SJ, S-MC, YP, DC, dhe JL kryen eksperimente dhe gjenerimin e të dhënave. J-WC, S-HP, J-SC dhe D-JK kanë mbledhur mostrat e gjakut dhe informacionin klinik. ML, HC, S-HY, dhe Y-JC analizuan të dhënat. ML, HC, S-HY, dhe Y-JC përshkruan dorëshkrimin. Y-JC mbikëqyrte projektin.

Deklarata e Konfliktit të Interesit

Autorët deklarojnë se hulumtimi është kryer në mungesë të ndonjë marrëdhënie tregtare ose financiare që mund të interpretohet si një konflikt i mundshëm interesi.

Shënimet

 

Financimi. Kjo punë u mbështet nga një grant nga Programi i Kërkimit të Trurit nëpërmjet Fondacionit Kombëtar të Kërkimeve të Koresë (NRF), financuar nga Ministria e Shkencës dhe TIK dhe Planifikimi i Ardhshëm (NRF-2015M3C7A1064778).

 

 

Materiale plotësuese

Materiali plotësues për këtë artikull mund të gjendet në internet http://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fpsyt.2018.00081/full#supplementary-material.

Referencat

1. Young KS. Varësia e internetit: shfaqja e një çrregullimi të ri klinik. Cyber ​​Psychol Behav (1998) 1 (3): 237-44.10.1089 / cpb.1998.1.237 [Cross Ref]
2. Petri NM, Rehbein F, Ko CH, O'Brien CP. Çrregullimi i lojrave në Internet në DSM-5. Curr Psychiatry Rep (2015) 17 (9): 72.10.1007 / s11920-015-0610-0 [PubMed] [Cross Ref]
3. Cho H, Kwon M, Choi JH, Lee SK, Choi JS, Choi SW, et al. Zhvillimi i shkallës së varësisë në internet bazuar në kriteret e çrregullimit të lojërave të internetit të sugjeruar në DSM-5. Addict Behav (2014) 39 (9): 1361-6.10.1016 / j.addbeh.2014.01.020 [PubMed] [Cross Ref]
4. Kuss DJ, Griffiths MD, Karila L, Billieux J. Varësia në internet: një rishikim sistematik i hulumtimeve epidemiologjike për dekadën e fundit. Curr Pharm Des (2014) 20 (25): 4026-52.10.2174 / 13816128113199990617 [PubMed] [Cross Ref]
5. Park M, Choi JS, Park SM, Lee JY, Jung HY, Sohn BK, et al. Përpunimi jofunksional i informacionit gjatë një detyre potenciale të lidhur me ngjarjen në individë me çrregullim të lojërave të internetit. Psikiatria e Përkthimit (2016) 6: e721.10.1038 / tp.2015.215 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
6. Lim JA, Lee JY, Jung HY, Sohn BK, Choi SW, Kim YJ, et al. Ndryshimet e cilësisë së jetës dhe funksioni njohës në individët me çrregullim të lojërave të internetit: një vazhdim i 6-mujorit. Mjekësia (Baltimore) (2016) 95 (50): e5695.10.1097 / MD.0000000000005695 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
7. van Rooij AJ, Van Looy J, Billieux J. Çrregullimi i lojrave në Internet si një konstruktim formativ: implikime për konceptualizim dhe matje. Neurosci i psikiatrisë (2016) 71 (7): 445-58.10.1111 / pcn.12404 [PubMed] [Cross Ref]
8. Shoqata Amerikane e Psikiatrisë, redaktor. , redaktor. Manual Diagnostik dhe Statistikor të Çrregullimeve Mendore: DSM-5. 5th ed Arlington, VA: Shoqata Amerikane e Psikiatrisë; (2013).
9. Vink JM, van Beijsterveldt TC, Huppertz C, Bartels M, Boomsma DI. Trashëgimia e përdorimit të pandërprerë të internetit në adoleshentët. Addict Biol (2016) 21 (2): 460-8.10.1111 / adb.12218 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
10. Li M, Chen J, Li N, Li X. Një studim i binjakëzuar i përdorimit problematik të internetit: heritabiliteti i saj dhe shoqërimi gjenetik me kontrollin e mundimshëm. Binjakët Res Gene Hum (2014) 17 (4): 279-87.10.1017 / thg.2014.32 [PubMed] [Cross Ref]
11. Han DH, Lee YS, Yang KC, Kim KE, Lyoo IK, Renshaw PF. Gjenet e dopaminës dhe varësia e shpërblimit në adoleshentët me lojëra të tepruar në internet. J Addict Med (2007) 1 (3): 133-8.10.1097 / ADM.0b013e31811f465f [PubMed] [Cross Ref]
12. Lee YS, Han DH, Yang KC, Daniels MA, Na C, Kee BS, et al. Depresioni si karakteristikat e polimorfizmit 5HTTLPR dhe temperamentit në përdoruesit e tepërt të internetit. J Ndikimi Disorder (2008) 109 (1-2): 165-9.10.1016 / j.jad.2007.10.020 [PubMed] [Cross Ref]
13. Montag C, Kirsch P, Sauer C, Markett S, Reuter M. Roli i gjenit CHRNA4 në varësinë e internetit: një studim i rastit. J Addict Med (2012) 6 (3): 191-5.10.1097 / ADM.0b013e31825ba7e7 [PubMed] [Cross Ref]
14. Kim JY, Jeong JE, Rhee JK, Cho H, Chun JW, Kim TM, et al. Synimi i synuar i sekuencës për identifikimin e një variant mbrojtës kundër çrregullimit të lojrave në internet në rs2229910 të receptorit neurotrofik të tirozinës kinazit, tipit 3 (NTRK3): një studim pilot. J Behav Addict (2016) 5 (4): 631-8.10.1556 / 2006.5.2016.077 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
15. Çështja O, Chen A. Përcaktimi i rolit të microRNAs në çrregullime psikiatrike. Nat Rev Neurosci (2015) 16 (4): 201-12.10.1038 / nrn3879 [PubMed] [Cross Ref]
16. Kocerha J, Dwivedi Y, Brennand KJ. ARN-të pa-koduese dhe mekanizmat neuro-sjellës në sëmundjen psikiatrike. Psikiatria Mol (2015) 20 (6): 677-84.10.1038 / mp.2015.30 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
17. Ambros V. MicroRNAs: rregullatorët e vegjël me potencial të madh. (2001) 107 (7): 823-6.10.1016 / S0092-8674 (01) 00616-X [PubMed] [Cross Ref]
18. Hollins SL, Cairns MJ. MicroRNA: ndërmjetësuesit e vogël të ARN-së në përgjigjen gjenomike të trurit ndaj stresit mjedisor. Prog Neurobiol (2016) 143: 61-81.10.1016 / j.pneurobio.2016.06.005 [PubMed] [Cross Ref]
19. Lopez JP, Lim R, Cruceanu C, Crapper L, Fasano C, Labonte B, et al. miR-1202 është një mikroRNA e pasur me primat dhe e pasuruar nga truri, e përfshirë në depresion të madh dhe trajtim antidepresiv. Nat Med (2014) 20 (7): 764-8.10.1038 / nm.3582 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
20. Kim YS, Cheon KA, Kim BN, Chang SA, Yoo HJ, Kim JW, et al. Besueshmëria dhe vlefshmëria e orarit të këshillave për çrregullimet emocionale dhe versionin skizofrenian të pranishëm dhe të përjetshëm Versioni korean (K-SADS-PL-K). Yonsei Med J (2004) 45 (1): 81-9.10.3349 / ymj.2004.45.1.81 [PubMed] [Cross Ref]
21. Kwak K, Oh S, Kim C. Manual për Shkencën Koreane të Inteligjencës Wechsler për Fëmijët-IV (K-WISC-IV) -Manual. Seul, Koreja e Jugut: Hakjisa; (2011).
22. Patton JH, Stanford MS, Barratt ES. Struktura e faktorëve të Shkallës Impulsiveness Barratt. J Clin Psychol (1995) 51 (6): 768–74.10.1002 / 1097-4679 (199511) 51: 6 <768 :: AID-JCLP2270510607> 3.0.CO; 2-1 [PubMed] [Cross Ref]
23. Carver C, White TL. Frenimi i sjelljes, aktivizimi i sjelljes dhe përgjigjet emocionale ndaj shpërblimit dhe ndëshkimit të afërt: shkallët BIS / BAS. J Pers Soc Psychol (1994) 67 (2): 319-33.10.1037 // 0022-3514.67.2.319 [Cross Ref]
24. Weiland M, Gao XH, Zhou L, Mi QS. ARN të vogla kanë një ndikim të madh: qarkullimin e microRNAs si biomarkers për sëmundjet e njeriut. ARN Biol (2012) 9 (6): 850-9.10.4161 / rna.20378 [PubMed] [Cross Ref]
25. (2009): 25-24 / bioinformatika / btp3325 [6.10.1093] 578 (XNUMX): XNUMX (XNUMX): XNUMX-XNUMX / bioinformatika / btpXNUMX [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
26. Leek JT, Storey JD. Kapja e heterogjenitetit në studimet e shprehjes së gjeneve nga analiza variabile surrogate. PLoS Gjenet (2007) 3 (9): 1724-35.10.1371 / journal.pgen.0030161 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
27. Chen J, Bardes EE, Aronow BJ, Jegga AG. Suite ToppGene për analizën e pasurimit të gjeneve dhe prioritizimin e gjeneve të kandidatëve. Nucleic Acids Res (2009) 37 (Çështja e Serverit): W305-11.10.1093 / nar / gkp427 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
28. Ashburner M, Ball CA, Blake JA, Botstein D, Butler H, Cherry JM, et al. Ontologjia e gjeneve: mjet për unifikimin e biologjisë. Konsorciumi i ontologjisë së gjeneve. Nat Genet (2000) 25 (1): 25-9.10.1038 / 75556 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
29. Cheon DH, Nam EJ, Park KH, Woo SJ, Lee HJ, Kim HC, et al. Analiza gjithëpërfshirëse e proteomës së plazmës humane me peshë molekulare duke përdorur spektrometrin masiv top-poshtë. J Mbrojtja Res (2016) 15 (1): 229-44.10.1021 / acs.jproteome.5b00773 [PubMed] [Cross Ref]
30. Park CH, Chun JW, Cho H, Jung YC, Choi J, Kim DJ. A është truri i lojërave të internetit të varur afër gjendjes patologjike? Addict Biol (2017) 22 (1): 196-205.10.1111 / adb.12282 [PubMed] [Cross Ref]
31. Dweep H, Gretz N. miRWalk2.0: një atlas i plotë i ndërveprimeve të targetimit me mikroNRNA. Nat Metodat (2015) 12 (8): 697.10.1038 / nmeth.3485 [PubMed] [Cross Ref]
32. Enright AJ, John B, Gall U, Tuschl T, Sander C, Marks DS. Objektivat e MicroRNA në Drosophila. Gjenomi Biol (2003) 5 (1): R1.10.1186 / gb-2003-5-1-r1 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
33. Miranda KC, Huynh T, Tay Y, Ang YS, Tam WL, Thomson AM, et al. Një metodë e bazuar në model për identifikimin e vendeve të lidhjes së mikroNR dhe heteroduplexes përkatëse të tyre. Qeliza (2006) 126 (6): 1203-17.10.1016 / j.cell.2006.07.031 [PubMed] [Cross Ref]
34. Lewis BP, Burge CB, Bartel DP. Mbetjet e farërave të konservuara, shpesh të rrethuara nga adenozina, tregojnë se mijëra gjene njerëzore janë objektiva të mikro-RNA. Qeliza (2005) 120 (1): 15-20.10.1016 / j.cell.2004.12.035 [PubMed] [Cross Ref]
35. Schratt GM, Tuebing F, pranë EA, Kane CG, Sabatini ME, Kiebler M, et al. Një mikroRNA specifike e trurit rregullon zhvillimin e shpinë të dendritit. Natyra (2006) 439 (7074): 283-9.10.1038 / nature04367 [PubMed] [Cross Ref]
36. Sempere LF, Freemantle S, Pitha-Rowe I, Moss E, Dmitrovsky E, Ambros V. Profilizimi i shprehjes së mikroRNA-ve të gjitarëve zbulon një nëngrup të mikroRNA-ve të shprehura nga truri me role të mundshme në diferencimin neuronal të murinës dhe njeriut. Gjenomi Biol (2004) 5 (3): R13.10.1186 / gb-2004-5-3-r13 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
37. Beveridge NJ, Tooney PA, Carroll AP, Gardiner E, Bowden N, Scott RJ, et al. Dysregulimi i miRNA 181b në korteksin temporal në skizofreninë. Hum Mol Genet (2008) 17 (8): 1156-68.10.1093 / hmg / ddn005 [PubMed] [Cross Ref]
38. Wei H, juan Y, Liu S, Wang C, Yang F, Lu Z, et al. Zbulimi i niveleve të qarkullimit të miRNA në skizofreninë. Am J Psikiatria (2015) 172 (11): 1141-7.10.1176 / appi.ajp.2015.14030273 [PubMed] [Cross Ref]
39. Dwivedi Y. Aplikacionet patogjenetike dhe terapeutike të microRNAs në çrregullime të mëdha depresive. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psikiatria (2016) 64: 341-8.10.1016 / j.pnpbp.2015.02.003 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
40. Hara N, Kikuchi M, Miyashita A, Hatsuta H, Saito Y, Kasuga K, et al. Serum microRNA miR-501-3p si një biomarker potencial që lidhet me progresin e sëmundjes Alzheimer. Acta Neuropathol Commun (2017) 5 (1): 10.10.1186 / s40478-017-0414-z [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
41. Gardiner E, Beveridge NJ, Wu JQ, Carr V., Scott RJ, Tooney PA, et al. Imprinted DLK1-DIO3 rajon i 14q32 përcakton një nënshkrim miRNA të lidhur me skizofreninë në qelizat mononukleare të gjakut periferik. Psikiatria Mol (2012) 17 (8): 827-40.10.1038 / mp.2011.78 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
42. Belzeaux R, Bergon A, Jeanjean V, Loriod B, Formisano-Treziny C, Verrier L, et al. Pacientët që kanë përgjigje dhe pacientë të tjerë nuk shfaqin nënshkrime të ndryshme transkriptiale periferike gjatë episodit të madh depresiv. Psikiatria e Përkthimit (2012) 2: e185.10.1038 / tp.2012.112 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
43. Lugli G, Torvik VI, Larson J, Smalheiser NR. Shprehja e microRNAs dhe prekursorëve të tyre në fraksionet synaptic e forebrain rritur të miut. J Neurochem (2008) 106 (2): 650-61.10.1111 / j.1471-4159.2008.05413.x [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
44. Stary CM, Xu L, Sun X, Ouyang YB, White RE, Leong J, et al. MicroRNA-200c kontribuon në dëmtimin nga ishemi cerebrale të përkohshme fokale duke synuar reelinin. Stroke (2015) 46 (2): 551-6.10.1161 / STROKEAHA.114.007041 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
45. Lai CY, Yu SL, Hsieh MH, Chen CH, Chen HY, Wen CC, et al. Aberration shprehje MicroRNA si biomarkers potenciale periferike të gjakut për skizofreninë. PLoS Një (2011) 6 (6): e21635.10.1371 / journal.pone.0021635 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
46. Lai CY, Lee SY, Scarr E, Yu YH, Lin YT, Liu CM, et al. Shprehja e gabuar e microRNAs si biomarker për skizofreninë: nga gjendja akute deri te remisionet e pjesshme, dhe nga gjaku periferik në indet cortical. Psikiatria e Përkthimit (2016) 6: e717.10.1038 / tp.2015.213 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
47. Lewohl JM, Nunez YO, Dodd PR, Tiwari GR, Harris RA, Majfield RD. Up-rregullimi i microRNAs në trurin e alkoolistëve të njeriut. Alkooli Clin Exp Res (2011) 35 (11): 1928-37.10.1111 / j.1530-0277.2011.01544.x [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
48. Dill H, Linder B, Fehr A, Fischer U. Intronic miR-26b kontrollon diferencimin neuronal duke shtypur transkriptin e tij pritës, ctdsp2. Gjenet Dev (2012) 26 (1): 25-30.10.1101 / gad.177774.111 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
49. Perkins DO, Jeffries CD, Jarskog LF, Thomson JM, Woods K, Newman MA, et al. Shprehja MicroRNA në korteksin prefrontal të individëve me skizofreninë dhe çrregullime skizoaffektive. Gjenomi Biol (2007) 8 (2): R27.10.1186 / gb-2007-8-2-r27 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
50. Kumar K, Sharma S, Kumar P, Deshmukh R. Potenciali terapeutik i ligandëve të receptorit GABA (B) në varësinë nga droga, ankthi, depresioni dhe çrregullime të tjera të CNS. Pharmacol Biochem Behav (2013) 110: 174-84.10.1016 / j.pbb.2013.07.003 [PubMed] [Cross Ref]
51. McCracken ML, Borghese CM, Trudel JR, Harris RA. Një aminoacid transmembran në receptorin GABAA beta2 kritike për veprimet e alkooleve dhe anestetikëve. J Pharmacol Exp Ther (2010) 335 (3): 600-6.10.1124 / jpet.110.170472 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
52. Zong L, Zhou L, Hou Y, Zhang L, Jiang W, Zhang W, et al. Rregullimi gjenetik dhe epigenetik mbi transkriptimin e GABRB2: hidroksimetilacioni i varur nga gjenotipi dhe ndryshimet e metilimit në skizofreninë. J Psychiatr Res (2017) 88: 9-17.10.1016 / j.jpsychires.2016.12.019 [PubMed] [Cross Ref]
53. Fukata Y, Itoh TJ, Kimura T, Menager C, Nishimura T, Shiromizu T, et al. CRMP-2 lidhet me heterodimeret e tubulinës për të promovuar asamblenë mikrotubulare. Nat Cell Biol (2002) 4 (8): 583-91.10.1038 / ncb825 [PubMed] [Cross Ref]
54. Kekesi KA, Juhasz G, Simor A, Gulyassy P, Szego EM, Hunjadi-Gulyas E, et al. Ndryshuar rrjetet funksionale të proteinave në korteksin paraballor dhe amygdala të viktimave të vetëvrasjes. PLoS Një (2012) 7 (12): e50532.10.1371 / journal.pone.0050532 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
55. Taylor A, Wang KS. Asociacioni midis polymorfizmave të gjeneve DPYSL2 dhe varësisë së alkoolit në mostrat Kaukaziane. J Neural Transm (Vjenë) (2014) 121 (1): 105-11.10.1007 / s00702-013-1065-2 [PubMed] [Cross Ref]
56. Hua T, Vemuri K, Pu M, Qu L, Han GW, Wu Y, et al. Struktura kristale e receptorit kanabinoid human CB1. Qeliza (2016) 167 (3): 750-62.e14.10.1016 / j.cell.2016.10.004 [Artikulli i lirë i PMC] [PubMed] [Cross Ref]
57. Benyaminina A, Kebir O, Blecha L, Reynaud M, Krebs MO. Polimorfizmat e gjeneve CNR1 në çrregullime Addictive: një rishikim sistematik dhe një meta-analizë. Addict Biol (2011) 16 (1): 1-6.10.1111 / j.1369-1600.2009.00198.x [PubMed] [Cross Ref]
58. Loureiro M, Kramar C, Renard J, Rosen LG, Laviolette SR. Transmetimi i kanabinoidit në hippocampus aktivizon neuronet e nucleus accumbens dhe modulon shpërblimin dhe ndjeshmërinë emocionale të lidhur me aversionin. Psikiatria e Biolimit (2016) 80 (3): 216-25.10.1016 / j.biopsych.2015.10.016 [PubMed] [Cross Ref]
59. Kasem E, Kurihara T, Tabuchi K. Neureksinat dhe çrregullimet neuropsikiatrike. Neurosci Res (2017) 127: 53-60.10.1016 / j.neures.2017.10.012 [PubMed] [Cross Ref]